佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠促腎上腺皮質(zhì)激素及白細(xì)胞介素6水平的動態(tài)觀察.pdf

1、目的：類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RheumatoidArthritis，RA)是一種慢性自身免疫性疾病，其基本病理改變是滑膜炎，急性期滑膜腫脹、滲出，中性粒細(xì)胞浸潤，慢性期滑膜增生肥厚，軟骨吸收，骨質(zhì)破壞和骨纖維化。許多研究已經(jīng)表明淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、滑膜細(xì)胞等多種炎癥細(xì)胞介導(dǎo)的異常細(xì)胞免疫、體液免疫而導(dǎo)致的關(guān)節(jié)局部和全身的免疫功能紊亂，在RA的病理中起著重要作用。RA的病因還不完全清楚。近年來，隨著神經(jīng)內(nèi)分泌免疫學(xué)的發(fā)展，下丘腦一垂體

2、一腎上腺皮質(zhì)軸(Hypothalamic-pituitary-adrenalaxis，HPAA)在RA發(fā)病中所起的作用越來越受到人們的重視。由完全弗氏佐劑所誘導(dǎo)的佐劑關(guān)節(jié)炎(AdjuvantArthritis，AA)大鼠模型被認(rèn)為具有與RA相似的關(guān)節(jié)炎變化，本試驗即以其為基礎(chǔ)，動態(tài)觀察促腎上腺皮質(zhì)激素(AdrenocorticotropicHormone，ACTH)及白細(xì)胞介素6(Interleukin-6，IL-6)在佐劑關(guān)節(jié)炎大鼠血

3、清及滑膜中的表達(dá)，探討神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)及免疫系統(tǒng)在RA發(fā)病中的可能作用。 方法：(1)選用45只雄性Wistar大鼠，隨機(jī)分成9組，每組5只，分別命名為Ⅰ-Ⅸ，其中Ⅰ組為正常對照組，Ⅱ-Ⅶ組分別為AA模型建立后不同時間的實驗組，Ⅱ組為7d，Ⅲ組為14d，Ⅳ組為21d，Ⅴ組為28d，Ⅵ組為35d，Ⅶ組為42d，Ⅷ組為49d，Ⅸ組為56d，其中實驗組每只大鼠給予尾根部皮內(nèi)注射完全弗氏佐劑(CFA)0.2ml制作AA模型。(2)于注射后

4、連續(xù)觀察大鼠的一般情況及關(guān)節(jié)炎癥表現(xiàn)，并計算關(guān)節(jié)炎指數(shù)(AI)；各組于規(guī)定時間下腔靜脈采血，離心備用，采用雙抗體夾心ABC-ELISA法測定血清中IL-6水平，應(yīng)用IMMULITE分析儀測定血清中ACTH的水平。(3)分別于規(guī)定時間采血處死后取大鼠雙膝關(guān)節(jié)滑膜組織，10％甲醛溶液固定，石蠟包埋，行蘇木素-伊紅(HE)染色，光鏡下觀察關(guān)節(jié)滑膜襯里層細(xì)胞(LLC)增生，襯里下層炎細(xì)胞浸潤以及血管翳形成等病理變化。(4)對上述滑膜組織進(jìn)行AC

5、THSP以及IL-6SP免疫組織化學(xué)染色，并采用真彩色病理圖像分析系統(tǒng)4.0對其表達(dá)量進(jìn)行定量分析。(5)應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。 結(jié)果：(1)AA大鼠隨病程進(jìn)展，AI先升高后降低，滑膜襯里細(xì)胞層數(shù)則逐漸增加。(2)AA大鼠血清ACTH水平第7天即有上升，但正常對照組比較無顯著性差異(P＞0.05)，隨AI逐漸增加，血清ACTH水平逐漸升高，至28天AI達(dá)至高峰時，ACTH水平達(dá)到最高，與正常對照組相比有顯著性

6、差異(p＜0.05)，而后隨AI逐漸下降，ACTH水平亦有所下降，觀察至56天時基本恢復(fù)至正常水平，與正常組比較無顯著性差異(P＞0.05)；血清IL-6的水平變化與ACTH相似，但在早期即升高明顯，第7天時與正常對照組相比有顯著性差異(p＜0.05)。(3)AA大鼠血清ACTH水平與AI呈正相關(guān)(r=0.716，p＜0.01)；血清IL-6水平與AI呈正相關(guān)(r=0.584，p＜0.01)；血清ACTH與IL-6水平呈正相關(guān)(r=0.

7、746，p＜0.01)。(4)AA大鼠LLC隨病程增加而增加，與AI、血清ACTH、IL-6水平均無相關(guān)。(5)AA大鼠滑膜組織ACTH的表達(dá)隨病程進(jìn)展亦呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢，與AI呈正相關(guān)(r=0.725，p＜0.01)，滑膜IL-6表達(dá)與AI呈正相關(guān)(r=0.716，p＜0.01)，滑膜ACTH與滑膜IL-6表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.931，p＜0.01)。(6)血清中ACTH的水平與滑膜中ACTH的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.846，p＜

8、0.01)；血清中IL-6的水平與滑膜中IL-6的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.786，p＜0.01)。 結(jié)論：(1)血清IL-6水平及滑膜IL-6表達(dá)均與AI呈正相關(guān)，且在早期無明顯關(guān)節(jié)炎癥狀時即有明顯升高，提示IL-6可作為RA的早期活動性指標(biāo)之一。(2)血清IL-6水平與滑膜IL-6的表達(dá)呈正相關(guān)，且滑膜中IL-6升高較血清中為著，說明IL-6主要在局部發(fā)揮作用，應(yīng)用抗IL-6的生物制劑可能對于延緩局部關(guān)節(jié)破壞有一定作用。(3)血

9、清ACTH水平與滑膜ACTH的表達(dá)也均與AI呈正相關(guān)，提示無論是在外周血還是局部關(guān)節(jié)，ACTH均起到了一定的抗炎作用。在外周血，細(xì)胞因子刺激HPAA釋放ACTH發(fā)揮抗炎作用，在局部關(guān)節(jié)則可能是滑膜細(xì)胞、單核細(xì)胞及成纖維細(xì)胞自分泌或旁分泌irACTH對抗細(xì)胞因子的致炎作用。(4)血清ACTH水平與滑膜中ACTH的表達(dá)呈正相關(guān)，但在后期血清中ACTH降至正常時，滑膜及單核細(xì)胞、成纖維細(xì)胞中仍有明顯表達(dá)，提示HPAA對局部關(guān)節(jié)的irACTH無