大鼠佐劑性和膠原性關(guān)節(jié)炎模型特點(diǎn)及膠原性關(guān)節(jié)炎大鼠滑膜細(xì)胞β-arrestin的表達(dá)和白芍總苷的作用.pdf

1、目的：比較弗氏完全佐劑(complete freund adjuvant，CFA)誘導(dǎo)的佐劑性關(guān)節(jié)炎(adjuvant arthritis，AA)和雞Ⅱ型膠原(chicken type Ⅱ collagen，CC Ⅱ)誘導(dǎo)的膠原性關(guān)節(jié)炎 (collagen-induced arthritis，CIA)大鼠體征、病理學(xué)和免疫學(xué)變化特點(diǎn)。觀察CIA大鼠滑膜細(xì)胞[3-arrestins表達(dá)以及白芍總苷(total glucosides ofp

2、aeony，TGP)體內(nèi)給藥后β-arrestins表達(dá)的變化情況，以進(jìn)一步闡明類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)的發(fā)病機(jī)制和TGP治療RA的藥理作用機(jī)制。 方法：采用CFA足趾注射法誘導(dǎo)大鼠AA模型，CC Ⅱ足趾、尾根部和背部皮內(nèi)多點(diǎn)注射并一周后加強(qiáng)免疫法誘導(dǎo)大鼠CIA模型，觀察兩種實(shí)驗(yàn)性關(guān)節(jié)炎大鼠的全身情況、體重、足爪腫脹度、多發(fā)性關(guān)節(jié)炎評分、病理學(xué)和血清C Ⅱ抗體濃度變化以及發(fā)病率。檢測AA大鼠

3、胸腺T淋巴細(xì)胞增殖和腹腔巨噬細(xì)胞IL-1、TNF-α、PGE<,2>的產(chǎn)生變化及重組人白細(xì)胞介素-1 受體拮抗劑 (recombinant humaninterleukin-1 receptor antagon，RhIL-1Ra)對其的影響。選用大鼠CIA模型，TGP(25、50、100mg·kg<'-1>·d<'-1>) 灌胃給藥 (intragastric injection administration，ig)(d14～d28)，

4、檢測大鼠體重、足爪腫脹度；進(jìn)行多發(fā)性關(guān)節(jié)炎評分；光學(xué)顯微鏡下觀察關(guān)節(jié)滑膜的病理學(xué)改變；MTT法檢測T、B淋巴細(xì)胞和滑膜細(xì)胞的增殖度；Westem blot 法檢測βp-arrestins在疾病進(jìn)程中的表達(dá)變化和不同劑量TGP體內(nèi)給藥對β-arrestins表達(dá)的影響。 結(jié)果： 1．大鼠AA模型和CIA模型的特點(diǎn) 兩種實(shí)驗(yàn)性關(guān)節(jié)炎大鼠體重增長均顯著減慢，AA大鼠在致炎后d10左右非致炎側(cè)足爪容積已明顯增加，d20左

5、右達(dá)峰值。CIA大鼠d14左右對側(cè)足爪出現(xiàn)紅腫，d28左右達(dá)峰值，關(guān)節(jié)炎的持續(xù)時(shí)間較長，足爪評分變化與關(guān)節(jié)腫脹相一致。兩者發(fā)病率沒有差異，且都有明顯的病理學(xué)改變。AA和CIA大鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌的IL-1、TNF-α和PGE<,2>水平明顯升高，給予RhIL-1Ra均可減少上述細(xì)胞因子的產(chǎn)生。AA大鼠和CIA大鼠體內(nèi)都存在細(xì)胞免疫功能異常，CIA模型體內(nèi)還存在針對Ⅱ型膠原的高滴度IgG抗體，免疫功能變化兼有體液免疫和細(xì)胞免疫。兩種實(shí)驗(yàn)性

6、關(guān)節(jié)炎模型各有特點(diǎn)，無論在其臨床表現(xiàn)、病理學(xué)及免疫學(xué)改變和發(fā)病機(jī)制等方面均與人類RA相似，都是研究RA、篩選抗炎免疫藥物的較理想模型。 2．TGP對CIA大鼠繼發(fā)性關(guān)節(jié)炎癥、關(guān)節(jié)病理和免疫功能的影響 TGP (25、50、100mg·kg<'-1>，ig，d14～d28)可明顯減輕CIA大鼠的足爪腫脹度，有效增加CIA大鼠的體重。TGP三個(gè)劑量組能不同程度地改善關(guān)節(jié)病理，其中TGP (100mg·kg<'-1>，ig，d

7、14～d28)改善最為顯著。CIA大鼠血清CII抗體水平顯著升高，TGP各劑量組對CII抗體濃度沒有影響。CIA大鼠T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)均增強(qiáng)，成纖維樣滑膜細(xì)胞(fibroblast-like synoviocytes，F(xiàn)LS)增殖反應(yīng)增強(qiáng)，TGP(25、50、100mg·kg<'-1>，ig，d14～d28)可明顯抑制CIA大鼠T、B淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)，TGP(50、100mg·kg<'-1>，ig，d14～d28)可抑制FL

8、S增殖反應(yīng)。 3．CIA大鼠滑膜中β-arrestins的表達(dá)情況及TGP對其的影響 CIA大鼠致敏后d14，滑膜細(xì)胞中β-arrestins表達(dá)水平顯著升高，d28仍維持較高水平，d42恢復(fù)到正常組水平，與炎癥的發(fā)展過程相一致。提示β-arrestins在RA發(fā)病過程中起到了重要作用。CIA大鼠致敏d28，Western blot法檢測滑膜細(xì)胞β-arrestins表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)TGP(50、100mg·kg<'-1>

9、，ig，d14～d28)能明顯減少致炎后β-arrestins的表達(dá)。這一結(jié)果表明TGP通過影響GRK/arrestin脫敏機(jī)制，調(diào)節(jié)G蛋白-cAMP信號通路而發(fā)揮治療作用。 結(jié)論： 1．大鼠AA和CIA模型臨床表現(xiàn)、病理學(xué)及免疫學(xué)改變均與人類RA相似，各有特點(diǎn)，是篩選和研究治療RA藥物的理想模型。 2．TGP能明顯改善CIA大鼠多發(fā)性關(guān)節(jié)炎癥、繼發(fā)性關(guān)節(jié)腫脹及病理形態(tài)，恢復(fù)異常的免疫功能，抑制滑膜細(xì)胞的增殖反應(yīng)