胡蘿卜與黃芪細胞融合技術(shù)的研究.pdf

1、黃芪[Astragalus membranaceus(Fisch.)Bunge]為多年生豆科(Fabaceae)植物，其干燥根為常用滋補中藥材，含有活性較強的三萜皂苷、黃酮類、多糖類、氨基酸、微量元素以及棕櫚酸、羽扇豆醇等。但由于草原荒漠化以及亂采挖等原因，藥用野生黃芪資源已十分貧乏，即使采用人工栽培的方法不僅產(chǎn)量不能滿足市場需求，而且品質(zhì)也得不到保證。胡蘿卜是植物組織培養(yǎng)中經(jīng)典實驗材料之一，也是近年來進行遺傳操作的主要材料。以胡蘿卜原

2、生質(zhì)體為受體，進行外源基因?qū)氲难芯浚紫纫⒁惶追€(wěn)定、高效的原生質(zhì)培養(yǎng)系統(tǒng)。因此，用細胞融合等現(xiàn)代生物技術(shù)將中藥黃芪的藥用成分基因轉(zhuǎn)入胡蘿卜中，為提高種質(zhì)資源生物量、優(yōu)化品質(zhì)具有重要意義。
　　 1.建立了由黃芪葉片誘導(dǎo)愈傷組織的技術(shù)體系。愈傷組織的誘導(dǎo)效果受培養(yǎng)基、植物生長調(diào)節(jié)激素種類、濃度以及配比等因素的影響。將葉片接種在MS的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，獲得愈傷組織；然后在添加2,4-D的MS增殖培養(yǎng)基上獲得增殖培養(yǎng)。
　　

3、 2.以黃芪葉片和愈傷組織為材料，對黃芪原生質(zhì)體的制備分離技術(shù)進行了研究。結(jié)果表明：采用黃芪葉片制備原生質(zhì)體遠遠優(yōu)于黃芪愈傷組織，能夠獲得高產(chǎn)量高活力的原生質(zhì)體；采用2.0％纖維素酶+0.5％半纖維素酶+0.5％果膠酶的混合酶，低速(35～40rpm)恒溫搖床上水解12小時就能達到較好的分離效果，獲得高質(zhì)量的黃芪原生質(zhì)體，并且黃芪原生質(zhì)體純化時以800rpm離心6～8分鐘效果較好。
　　 3.利用PEG結(jié)合高Ca2+-高pH法誘