人細(xì)胞融合肝癌疫苗的制備以及細(xì)胞電融合芯片的初步實驗研究.pdf

1、原發(fā)性肝癌(簡稱肝癌) 是我國常見、難治性惡性腫瘤之一，占我國惡性腫瘤死亡率的第2位。手術(shù)切除仍為肝癌治療的首選方法，但其療效仍欠滿意，術(shù)后復(fù)發(fā)是影響其療效的主要因素，研究和尋找抗肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)方法是近年來國內(nèi)外學(xué)者共同關(guān)注的課題。本研究取人外周血，分離出B淋巴細(xì)胞并激活。應(yīng)用PEG融合技術(shù)，制備了人體激活B細(xì)胞和肝癌細(xì)胞融合細(xì)胞，檢測到融合率為28.6％，融合細(xì)胞的存活率為95.6％。觀察了激活B細(xì)胞表面CD20分子和MHC-Ⅱ分子的表

2、達(dá)；融合細(xì)胞不僅表達(dá)腫瘤細(xì)胞表面分子，同時也高表達(dá)MHC-Ⅱ分子。 細(xì)胞融合技術(shù)是近幾十年來迅速發(fā)展起來的一項新興細(xì)胞工程技術(shù)。此技術(shù)可以培養(yǎng)新的物種、品系或制備新的細(xì)胞工程產(chǎn)品，如抗腫瘤疫苗、單克隆抗體等等。目前來說，細(xì)胞融合已經(jīng)是一項比較成熟的技術(shù)了。而在九十年代，興起了一項新技術(shù)——MEMS技術(shù)。本項目緊密跟隨細(xì)胞電融合領(lǐng)域內(nèi)的發(fā)展方向，提出并設(shè)計加工出了微電極陣列的細(xì)胞電融合芯片。在本課題中，我們通過實驗成功驗證了細(xì)胞電

3、融合的電介質(zhì)電泳以及細(xì)胞在交流電場的排隊現(xiàn)象。在利用細(xì)胞電融合芯片進(jìn)行融合的實驗中，發(fā)現(xiàn)人肝癌細(xì)胞系7721細(xì)胞在芯片中僅有個別的細(xì)胞能夠?qū)崿F(xiàn)兩兩細(xì)胞接觸并黏附在電極上，既而實現(xiàn)融合。但是芯片的重復(fù)性不好，在以后的實驗中基本上觀察不到任何現(xiàn)象。 本論文還利用雞紅細(xì)胞進(jìn)行了PEG法和細(xì)胞電融合芯片方法的對照實驗。在PEG法中，研究了不同分子量、不同濃度的PEG對細(xì)胞融合率的影響，得到了PEG法的最佳融合條件；在細(xì)胞電融合芯片方法中