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1、目的:課題擬從體內(nèi)、體外兩個(gè)方面,探討肉蓯蓉總苷對(duì)小鼠酒精性肝損傷的保護(hù)作用。
方法:(一)體內(nèi)實(shí)驗(yàn):取昆明種小鼠40只,按其體重、性別隨機(jī)分組,分別為模型組、空白組、肉蓯蓉總苷小劑量組(50 mg/kg)和大劑量組(100 mg/kg)。連續(xù)灌胃給藥28天,酒精每天1次,肉蓯蓉總苷每天2次;到達(dá)時(shí)限后稱重,眶動(dòng)靜脈叢采血處理,取血清檢測(cè)各項(xiàng)肝功指標(biāo);小心摘取肝臟,吸水紙吸水后稱重,計(jì)算肝臟指數(shù);再剪取適量制成肝臟勻漿,相關(guān)試
2、劑盒檢測(cè)其生化指標(biāo);剩余肝臟用10%的甲醛固定后做病理學(xué)評(píng)價(jià)。(二)體外實(shí)驗(yàn):原位灌流法收集小鼠肝細(xì)胞,測(cè)定生長(zhǎng)曲線,取對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)細(xì)胞,MT T法評(píng)價(jià)其肉蓯蓉總苷對(duì)損傷細(xì)胞活力的影響;顯微技術(shù)評(píng)價(jià)肉蓯蓉總苷對(duì)損傷細(xì)胞、細(xì)胞核形態(tài)的影響;流式細(xì)胞儀測(cè)定肉蓯蓉總苷對(duì)損傷后細(xì)胞凋亡方面的影響;染色法評(píng)價(jià)肉蓯蓉總苷對(duì)bcl-2、c-fos表達(dá)的影響。
結(jié)果:小鼠酒精性肝損傷后的肝功指標(biāo)、肝臟指數(shù)顯著升高(P<0.05);組織中TG、T
3、C、脂質(zhì)過(guò)氧化物(LPO)、丙二醛(MDA)的含量明顯高于空白組(P<0.05);超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽還原酶(GSH-Px)的活性明顯降低(P<0.05);病理學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)肝組織出現(xiàn)脂肪空泡和炎性浸潤(rùn)。表明肉蓯蓉總苷能顯著改變上述現(xiàn)象,表現(xiàn)在降低肝功指標(biāo)(P<0.05)和肝臟指數(shù),減少肝臟組織中TG、TC、MDA、LPO的含量(P<0.05),增強(qiáng)SOD、GSH-Px以及CAT的活性(P<0.05),減
4、少肝臟組織脂肪空泡和炎性浸潤(rùn)的產(chǎn)生,其中大劑量肉蓯蓉總苷組的作用更明顯。原代肝細(xì)胞經(jīng)酒精損傷后,細(xì)胞存活率降低(P<0.05),出現(xiàn)了顯著的凋亡及壞死改變,凋亡抑制基因bcl-2表達(dá)減弱、促凋亡基因c-fos呈現(xiàn)增強(qiáng)現(xiàn)象。其結(jié)果顯示,肉蓯蓉總苷能顯著提高細(xì)胞的存活率,改善凋亡及壞死情況,bcl-2的表達(dá)增強(qiáng),c-fos的表達(dá)減弱,作用呈劑量依賴性。
結(jié)論:肉蓯蓉總苷能通過(guò)減少自由基的產(chǎn)生,提高對(duì)自由基及其代謝產(chǎn)物的清除能力,進(jìn)
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