檉柳提取物對(duì)小鼠酒精性肝損傷的保護(hù)作用及其作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：通過(guò)觀察檉柳乙醇提取物對(duì)酒精性肝損傷模型小鼠的作用，來(lái)評(píng)估檉柳對(duì)酒精性肝損傷的保護(hù)作用，通過(guò)研究檉柳對(duì)酒精性肝損傷引起的肝臟內(nèi)NLRP3炎性小體活化和下游炎性因子IL-1β等過(guò)量表達(dá)以及NKT細(xì)胞在肝臟聚集等現(xiàn)象的調(diào)控作用，來(lái)判定檉柳是否通過(guò)NLRP3-Caspase-1-IL-1β通路來(lái)發(fā)揮作用。通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)研究，以期達(dá)到豐富檉柳的解酒保肝作用的機(jī)制，為其臨床廣泛應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：⑴采用慢性酒精喂養(yǎng)加急性酒精灌

2、胃法誘導(dǎo)小鼠酒精性肝損傷，將80只雄性C57BL/6J小鼠隨機(jī)均分為5組:正常對(duì)照組、酒精性肝損傷模型組、陽(yáng)性對(duì)照藥物組、檉柳低劑量組和檉柳高劑量組。⑵實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，比較各組小鼠體重、肝重和肝指數(shù)之間的差別。⑶通過(guò)HE染色和油紅O染色觀察肝組織的脂肪蓄積和損傷情況。⑷檢測(cè)外周血ALT、TG以及肝臟中AST、ROS、SOD和MDA水平。⑸采用免疫組化法檢測(cè)各組小鼠肝組織中NLRP3炎性小體組成成份(NLRP3、ASC、Caspase-1)和

3、相關(guān)炎性因子(IL-1β)的蛋白表達(dá)水平。⑹采用Western blot法檢測(cè)NLRP3炎性小體組成成份（NLRP3、ASC、Caspase-1）和相關(guān)炎性因子(1L-1β)的蛋白表達(dá)水平。⑺采用QRT-PCR法檢測(cè)NLRP3炎性小體組成成份(NLRP3、ASC、Caspase-1)和相關(guān)炎性因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)的mRNA表達(dá)水平。⑻采用流式細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)各組小鼠肝臟組織中NKT細(xì)胞在淋巴細(xì)胞中所占比例。
　　

4、結(jié)果：①鏡下觀察，與模型組相比，檉柳高、低劑量組小鼠肝小葉排列整齊，在中央靜脈區(qū)及匯管區(qū)可見有零星分布的胞漿中有脂滴存在的肝細(xì)胞，且肝細(xì)胞中脂滴空泡大小明顯減小。②與模型組相比，檉柳高、低劑量組小鼠肝臟指數(shù)顯著降低(P＜0.05)，血清中ALT和肝臟中AST水平顯著降低(P＜0.01)，檉柳高劑量組肝臟MDA含量顯著降低(P＜0.05)，SOD活性顯著升高(P＜0.05)。③與模型組比較，檉柳高、低劑量組小鼠肝臟SOD活性均呈升高趨勢(shì)，

5、ROS和MDA的含量均呈降低趨勢(shì)，其中檉柳高劑量組中三項(xiàng)指標(biāo)結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。④與模型組相比，檉柳高劑量組肝臟中NLRP3、ASC、Caspase-1和IL-1β的蛋白表達(dá)均顯著減少(P＜0.05)，檉柳高劑量組肝臟中NLRP3、ASC、Caspase-1和IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表達(dá)顯著降低(P＜0.05)。⑤與模型組相比，檉柳高劑量組肝臟組織中CD3+、NK1.1+雙陽(yáng)性的NKT細(xì)胞亞群占淋巴細(xì)胞的比例顯著降低