萊斯頓型埃博拉病毒GP蛋白嵌合型水泡性口炎病毒的構(gòu)建與免疫原性研究.pdf

1、埃博拉出血熱(EHF)是由埃博拉病毒(EBOV)引起的一種感染人和非人類靈長類動物急性出血性傳染病。EBOV屬于絲狀病毒科埃博拉病毒屬成員，為單股不分節(jié)段的負鏈RNA病毒。糖蛋白（GP）是EBOV誘導(dǎo)機體產(chǎn)生保護性中和抗體的關(guān)鍵蛋白也是表面唯一的跨膜蛋白。目前已知的EBOV共有五種，從1976年到2014年已經(jīng)造成數(shù)次大規(guī)模的流行。在五種埃博拉病毒中，扎伊爾型埃博拉病毒（ZEBOV）的毒力最強，在人和非人類靈長類動物上，感染性和致死率高

2、達90％以上，而萊斯頓型埃博拉病毒（REBOV）的毒力較弱，可引起食蟹猴發(fā)病和死亡，也可感染人但不出現(xiàn)明顯癥狀，無致病力。1989年間，從菲律賓進口到美國的一批醫(yī)用食蟹猴體內(nèi)首次檢測出了REBOV。2008年在菲律賓的豬場中，又再次檢測到了REBOV，同時豬伴隨有藍耳病病毒共同感染。然而到目前為止尚未有可用的疫苗，因此，安全、有效的萊斯頓型埃博拉病毒疫苗的研發(fā)具有重要意義。
　　水泡性口炎病毒（VSV）作為有囊膜單股負鏈不分節(jié)段R

3、NA病毒的復(fù)制和裝配機制研究的重要模型病毒，應(yīng)用范圍廣泛。VSV基因組長約11kb，從3'端至5'端依次編碼N、 P、 M、 G和L共5種蛋白，最長可容納4.5kb的外源片段，且插入的外源片段高度穩(wěn)定，具有較高的表達效率。
　　本研究利用RNA病毒反向遺傳操作技術(shù)，以重組病毒rVSV-EGFP為載體，用REBOV GP基因替換VSV G基因，構(gòu)建并拯救了嵌合病毒rVSV?G*EGFP-REBOV-GP。通過激光共聚焦檢測和west

4、ern blot試驗證明了REBOV GP蛋白在嵌合病毒中獲得正確表達。嵌合病毒生長動力學(xué)結(jié)果顯示，在細胞培養(yǎng)過程中，rVSV?G*EGFP-REBOV-GP與親本株rVSV-EGFP具有不同的生長特性。將rVSV?G*EGFP-REBOV-GP以5×106TCID50/0.1mL的高劑量肌肉注射接種小鼠，連續(xù)觀察兩周并且每日稱重，結(jié)果表明接種小鼠無一發(fā)病，體重增長趨勢與PBS對照組一致，說明嵌合病毒對小鼠不具致病性。將rVSV?G*E