土家藥刺老苞根皮干預(yù)骨折愈合機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　 運(yùn)用土家藥刺老苞根皮水煎劑對SD大鼠脛骨定位打孔骨折模型進(jìn)行干預(yù)，通過組織病理學(xué)、X-ray影像學(xué)、生物力學(xué)、骨密度、血清及骨生化學(xué)、分子生物學(xué)（血管內(nèi)皮生長因子1、2蛋白表達(dá)）等技術(shù)較綜合地評價(jià)其干預(yù)骨折愈合的療效，并就其調(diào)控骨折愈合的機(jī)制作一初步的探索。
　　 方法:
　　 建立大鼠脛骨骨折模型后，隨機(jī)分為模型組、刺老苞根皮高劑量組（以下簡稱高劑組）、刺老苞根皮中劑量組（以下簡稱中劑組）、刺老苞

2、根皮低劑量組（以下簡稱低劑組）、傷科接骨片組（以下簡稱中藥組）及左旋多巴組（以下簡稱西藥組），另設(shè)空白對照組（以下簡稱空白組），每組50只。按照骨折愈合分期要求，各組再按觀測時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)分成5個(gè)小組，每組10只，分別為4天組、7天組、14天組、21天組、28天組。除正常組和模型組灌服蒸餾水外，其他各組依次灌服:刺老苞根皮水煎劑高劑量、中劑量、低劑量、傷科接骨片混懸液、左旋多巴片混懸液。在各時(shí)間點(diǎn)末，處死，取血取材。依次通過HE染色和X-r

3、ay片觀察組織形態(tài)學(xué)變化;ICP-MS檢測骨礦物質(zhì)元素;三點(diǎn)彎曲法測試右側(cè)脛骨的生物力學(xué);骨密度儀檢測骨痂處骨密度;血清中堿性磷酸酶(ALP)活性、骨鈣素(BGP)和羥脯氨酸(HYP)含量及骨總膠原蛋白含量測定;免疫組化技術(shù)檢測Flt-1、Flk-1蛋白表達(dá)等相關(guān)試驗(yàn)。
　　 結(jié)果:
　　 1.組織形態(tài)學(xué):骨折4天后，打孔邊緣清晰;7天后，骨折部位形成成熟骨小梁;14天后打孔邊緣不慎清晰;21天后打孔邊緣模糊;28天后打

4、孔邊緣幾近消失。刺老苞根皮不同劑量組骨組織愈合較模型組快，以高、中劑量組更為顯著。修復(fù)速度與對照組相近。
　　 2.骨礦物元素指標(biāo):刺老苞根皮不同劑量組骨微量元素鈣、磷、鎂、銅、硒、錳含量均高于模型組，以高、中劑量組更為顯著的（與對照組及模型組比較:P＜0.01）。
　　 3.血清生化及骨生化指標(biāo):刺老苞根皮不同劑量組與模型組比較，4天時(shí)無明顯差異;7天～28天時(shí)，血清堿性磷酸酶活性升高，血清骨鈣素、羥脯氨酸含量增加，骨

5、總膠原蛋白含量增加，以高、中劑量組更為顯著（與對照組及模型組比較:P＜0.01）。
　　 4.免疫組化結(jié)果:4天時(shí)，骨痂處Flt-1和Flk-1表達(dá)較少，各給藥組與模型組相比有差異(P＜0.01，P＜0.05);7天～28天，骨痂處Flt-1和Flk-1表達(dá)增強(qiáng)，以7天時(shí)最強(qiáng)，各給藥組與模型組相比有差異(P＜0.01，P＜0.05);刺老苞根皮不同劑量組表達(dá)較其他各組強(qiáng)。
　　 5.骨生物力學(xué)指標(biāo):脛骨結(jié)構(gòu)力學(xué)和材料力學(xué)

6、參數(shù):撓度、載荷、應(yīng)力、應(yīng)變等參數(shù)，模型組與空白組比，差異顯著(P＜0.01)。各給藥組與模型組比，差異顯著(P＜0.01)。
　　 6.骨密度:骨折后4天、各組BMD值無顯著差異(P＞0.05)，7天、14天時(shí)高劑量組BMD值高于模型組(P＜0.01)，21天時(shí)，刺老苞根皮不同劑量組BMD值均高于模型組(P＜0.01)。28天時(shí)，各組BMD值無明顯差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.刺老苞根皮在骨愈

7、合過程中能刺激骨生成細(xì)胞增殖分化，縮短骨痂形成時(shí)間，使骨修復(fù)提前進(jìn)入重建期。
　　 2.刺老苞根皮在骨愈合過程中提高血清堿性磷酸酶活性及骨鈣素、羥脯氨酸的含量，加速骨基質(zhì)礦化，同時(shí)可增強(qiáng)骨總膠原蛋白含量。
　　 3.刺老苞根皮在骨愈合過程中不同程度的提高了骨缺損處Flt-1、Flk-1蛋白及mRNA的表達(dá)，加快骨愈合速度。這可能是刺老苞根皮促進(jìn)骨折愈合的分子機(jī)制之一。
　　 4.刺老苞根皮在骨愈合過程中補(bǔ)充骨修復(fù)