甲殼質(zhì)衍生物對大鼠骨折愈合的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的:復(fù)制大鼠脛骨中段骨折模型,探究三種甲殼質(zhì)衍生物(N-乙酰氨基葡萄糖、殼寡糖、壯骨液)對大鼠骨折愈合的作用和機(jī)制。
　　 方法:手術(shù)制備大鼠脛骨中段骨折模型,實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)為甲殼質(zhì)衍生物處理組(N-乙酰葡萄糖組、殼寡糖組、壯骨液)和模型組,于骨折術(shù)后7d、14d、21d,X線攝片和Alcianblue/HE學(xué)染色觀察骨折后骨骼愈合的組織學(xué)變化;免疫組織化學(xué)染色檢測增殖細(xì)胞核抗原(ProliferatingCellNuclearAn

2、tigen,PCNA);原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù)(TUNEL)檢測骨折后細(xì)胞凋亡率;酶生化法檢測血液中鈣、、磷離子濃度和堿性磷酸酶(Alcolinephospharase,ALP)活性;大鼠成骨細(xì)胞MC3T3-E1培養(yǎng)液中加入200-1000μg/ml殼寡糖孵育24h,MTT法、Hoest染色法和RT-PCR法分別檢測細(xì)胞增殖、凋亡及細(xì)胞中ALP和骨鈣素mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果:大鼠骨折后7d、14d、21d,甲殼質(zhì)衍生物治療

3、組中殼寡糖和壯骨液組骨痂生長愈合早于N-乙酰氨基葡萄糖組和模型組,骨痂中小梁骨占骨痂總面積的百分比高于模型組(p＜0.05),而纖維和軟骨成分低于模型組(p＜0.05)。骨折后7d,PCNA陽性細(xì)胞數(shù)量達(dá)最高峰,但不同處理組間差別無顯著性(p＞0.05);骨折后14d開始,殼寡糖和壯骨液治療組PCNA陽性細(xì)胞數(shù)量高于模型組(p＜0.05):21d時(shí)其PCNA陽性細(xì)胞數(shù)量低于模型組(p＜0.05)。TUNEL染色結(jié)果表明,骨折后14d為新

4、形成的軟骨細(xì)胞和骨痂中的成骨細(xì)胞凋亡最高峰;各時(shí)間段殼寡糖和壯骨液組TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)均少于模型組(p＜0.05)。骨折后14、21d殼寡糖和壯骨液組血鈣濃度和ALP活性明顯高于模型組(P＜0.05),血磷濃度高于模型組(P＜0.05)。體外實(shí)驗(yàn)中MTT結(jié)果顯示,殼寡糖孵育MC3T3-E1細(xì)胞組OD值顯著增高,且呈濃度依賴性(P＜0.01)。殼寡糖濃度為400-1000μg·mL-1能劑量依賴性地抑制MC3T3-E1細(xì)胞凋亡,提高AL