子宮內(nèi)膜組織StAR和Annexin Ⅳ表達(dá)及hCG對(duì)其調(diào)控.pdf

1、子宮內(nèi)膜組織的周期性改變和胚胎著床都是一個(gè)受多種因素共同調(diào)控的、復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)過程。目前臨床上通常采用超聲觀察子宮內(nèi)膜形態(tài)與厚度、測定血清雌、孕激素水平等方法評(píng)價(jià)子宮內(nèi)膜對(duì)胚胎的接受性。但這些方法存在一定局限性，不能連續(xù)、動(dòng)態(tài)和完整地反映子宮內(nèi)膜組織形態(tài)與功能轉(zhuǎn)化以及對(duì)胚胎接受能力的預(yù)測。子宮內(nèi)膜組織學(xué)改變與功能轉(zhuǎn)化也不完全一致。這在一定程度上也解釋了為什么一部分患者，即使子宮內(nèi)膜形態(tài)良好，反復(fù)移植優(yōu)質(zhì)胚胎仍然不能獲得胚胎著床。 月

2、經(jīng)周期中子宮內(nèi)膜組織隨卵巢甾體激素水平變化而表現(xiàn)出相應(yīng)的形態(tài)學(xué)與功能轉(zhuǎn)化，尤其在“種植窗期”前、后的改變是胚胎能否成功著床的必要條件之一。本文通過研究：1)月經(jīng)周期中人在體子宮內(nèi)膜組織AnnexinⅣ和StAR基因與蛋白質(zhì)表達(dá)的變化規(guī)律，結(jié)合組織學(xué)改變探討其在子宮內(nèi)膜功能轉(zhuǎn)化過程中的作用；2)采用體外子宮內(nèi)膜細(xì)胞培養(yǎng)模型，探討hCG對(duì)AnnexinⅣ和StAR蛋白表達(dá)的調(diào)控作用及其機(jī)制。 第一部分子宮內(nèi)膜組織 AnnexinⅣ和

3、StAR的周期性表達(dá) 研究目的： 生育力正常婦女月經(jīng)周期子宮內(nèi)膜組織AnnexinⅣ和StAR基因與蛋白表達(dá)。 研究方法： 通過組織微創(chuàng)活檢分別獲取月經(jīng)周期中增殖早、中、晚期和分泌早、中、晚期子宮內(nèi)膜標(biāo)本共22例。樣本共分為三部分，一部分用于制備石蠟組織切片，采用免疫組化方法進(jìn)行AnnexinⅣ和StAR蛋白質(zhì)的定位表達(dá)；剩余部分分別用于提取總蛋白樣品和總RNA樣品，進(jìn)行Western blot蛋白質(zhì)半定

4、量分析和RT—PCR法mRNA半定量分析。 研究結(jié)果： 1.正常月經(jīng)周期中，AnnexinⅣ蛋白和StAR蛋白在人類子宮內(nèi)膜均有表達(dá)。AnnexinⅣ蛋白主要定位于腺上皮和腔上皮細(xì)胞，以胞膜表達(dá)為主；StAR蛋白主要定位于基質(zhì)細(xì)胞，以胞漿表達(dá)為主。 2.AnnexinⅣ mRNA和蛋白質(zhì)半定量分析：月經(jīng)周期中EPP、MPP、LPP、ESP、MSP和LSP各期mRNA相對(duì)灰度值分別是8.34±1.85，7.79±2

5、.17，10.39±3.28，14.03±4.9，14.62±3.57，10.03±3.39。蛋白質(zhì)相對(duì)灰度值分別是1.57+0.54，1.60±0.48，2.13±0.75，2.69±0.98，3.16±0.94，2.27±0.54。MSP期mRNA和蛋白質(zhì)均顯著高于其它時(shí)期，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3.StAR mRNA和蛋白質(zhì)半定量分析：月經(jīng)周期中EPP、MPP、LPP、ESP、MSP和LSP各期mRNA相對(duì)灰度值分

6、別是0.72±0.12，0.76±0.15，0.86±0.39，0.94±0.13，1.49±0.32，1.00±0.32；蛋白質(zhì)相對(duì)灰度值分別是0.20±0.04，0.23±0.03，0.27±0.07，0.30±0.07，0.32±0.03，0.26±0.03。MSP期mRNA和蛋白質(zhì)均顯著高于其它時(shí)期，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 第二部分 hCG對(duì)RL95-2細(xì)胞AnnexinⅣ和StAR表達(dá)的調(diào)控研究 研究目的

7、： 1.LH/hCG—R、AnnexinⅣ和StAR在RL95-2細(xì)胞系的表達(dá)。 2.hCG對(duì)RL95-2細(xì)胞系A(chǔ)nnexinⅣ和StAR表達(dá)的調(diào)控作用和機(jī)制。 研究方法： 1.體外培養(yǎng)RL95-2細(xì)胞系，通過免疫熒光法對(duì)LH/hCG—R、AnnexinⅣ和StAR蛋白質(zhì)進(jìn)行細(xì)胞定位表達(dá)。 2.采用RT—PCR和Western blot法測定hCG預(yù)處理的RL95-2細(xì)胞AnnexinⅣ和StAR

8、 mRNA與蛋白質(zhì)水平。 2.測定MAPK通路阻斷劑PD98059處理后再添加hCG培養(yǎng)的RL95-2細(xì)胞AnnexinⅣ和StAR mRNA與蛋白質(zhì)水平。 結(jié)果： 1.AnnexinⅣ半定量分析：hCG預(yù)處理前、后比較，RL95-2細(xì)胞AnnexinⅣmRNA表達(dá)量分別為0.057±0.022和0.073±0.036，P>0.05。無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 2.StAR半定量分析：hCG預(yù)處理前、hCG預(yù)處理后和P

9、D98059阻斷后三組細(xì)胞StAR mRNA與蛋白質(zhì)表達(dá)分別是2.13±0.15，4.54±1.51，2.61±0.52和1.17±0.04，1.94±0.19，1.11±0.17。與對(duì)照組相比，hCG預(yù)處理后RL95-2細(xì)胞mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著升高，P=0.019和0.045；PD98059阻斷后表達(dá)無顯著差別，P=0.1和0.37，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論： 1：月經(jīng)周期人子宮內(nèi)膜組織存在AnnexinⅣ和StAR