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文檔簡介
1、[目的] 建立在位子宮內(nèi)膜細(xì)胞體外分離培養(yǎng)模型,分析血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)在人類子宮內(nèi)膜的表達(dá)及對其影響的調(diào)控因素,探討VEGF在子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生發(fā)展中的作用。 [方法] 選擇因子宮腺肌癥行(次)全子宮切除手術(shù)的病例8名,手術(shù)中取其子宮內(nèi)膜,經(jīng)酶解、過濾、貼壁純化等技術(shù)體外分離培養(yǎng)子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞,并對傳代后的細(xì)胞施加刺激物,分成常氧(O<,2>分壓19-21Kp)和缺氧(O<,2>分壓8-11Kp)組,每組用3種條件:
2、雌二醇(E<,2>,濃度10<'-8>mol/L)、黃體酮(P,濃度5×10<'-7>mol/L)、E<,2>+P(E<,2>濃度為10<'-8>mol/L,P濃度為5×10<'-7>mol/L)干預(yù)并用單純培養(yǎng)基作為對照,作用24小時,撤離刺激條件后同一時間點(diǎn)分別收集各種因素作用后的細(xì)胞及相應(yīng)上清液,應(yīng)用實時熒光定量RT-PCR(Real-Time RT-PCR)方法檢測細(xì)胞VEGF mRNA含量。 [結(jié)果] 8例標(biāo)本培養(yǎng)間質(zhì)
3、細(xì)胞,6例成功,在位子宮內(nèi)膜中VEGF的表達(dá)在缺氧及類固醇激素的影響下上調(diào)明顯。實時熒光定量RT-PCR方法細(xì)胞中VEGF mRNA相對表達(dá)量:缺氧組在E<,2>、P、E<,2>+P干預(yù)下及單純培養(yǎng)基空白對照分別為7.22±1.09、7.92±1.10、7.87±1.13及8.23±1.18;常氧組依次分別為6.07±1.04、6.75±1.02、6.19±1.06及9.94±1.34。兩組間干預(yù)前后對比,缺氧后細(xì)胞VEGF mRNA明
4、顯升高(P<0.05),組內(nèi)比較,雌、孕激素單獨(dú)及聯(lián)合干預(yù)下VEGF mRNA含量較空白對照升高(P<0.05)。并且發(fā)現(xiàn),缺氧聯(lián)合類固醇激素刺激與單一缺氧或激素作用相比,不增加細(xì)胞VEGF mRNA的表達(dá)(P>0.05)。 [結(jié)論] 實驗采用的方法獲得在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞作為體外細(xì)胞模型簡便高效;在位子宮內(nèi)膜表達(dá)一定水平VEGF,類固醇激素、缺氧可影響其表達(dá)強(qiáng)度,缺氧是子宮內(nèi)膜VEGF表達(dá)上調(diào)的重要影響因素,且不受同時應(yīng)用的雌
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