甲氨蝶呤影響輸卵管內(nèi)膜結(jié)構(gòu)及雌孕激素受體表達的實驗研究.pdf

1、目的： 探討甲氨蝶呤對輸卵管內(nèi)膜的組織學(xué)結(jié)構(gòu)、超微結(jié)構(gòu)及雌孕激素受體的急性損傷和遠期恢復(fù)情況，以及可能的量效關(guān)系。 方法： 1、制作動物模型及分組：72只SD雌性大鼠，皮下注射PMSG50u,48小時后再次皮下注射HCG100u，然后平均隨機分為A組和B組，每組36只。A、B兩組冉隨機分成4小組，分別定義為A0、A1、A2、A3和B0、B1、B2、B3。A0組和Bo組設(shè)為陰性對照組(腹腔注射生理鹽水0.5ml)、

2、A1組和B1組腹腔注MTX1mg/kg組、A2組和B2組腹腔注2mg/kg組和A3組和B3組腹腔注5mg/kg組。A組大鼠10天后處死取雙側(cè)輸卵管，留取標本。B組2月后處死取雙側(cè)輸卵管，留取標本。每組選一標本送電鏡觀察。其余10％多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，制成5μm厚的切片。分別HE染色及雌、孕激素受體的免疫組化染色。 2、對輸卵管標本進行常規(guī)的固定，脫水、透明、包埋、切片、HE染色，光學(xué)顯微鏡觀察地透射電子顯微鏡觀察。

3、 3、采用免疫組織化學(xué)SP二步法檢測各組輸卵管上ER、PR的表達。 4、統(tǒng)計學(xué)分析：采用SPSS10.0軟件包建立數(shù)據(jù)庫，使用x2檢驗、Kruskal-wallis檢驗、Mann-whitney檢驗進行統(tǒng)計學(xué)分析。顯著性水準a=0.05，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果： 1、光鏡下觀察結(jié)果：A1組、A2組和A3組標本中都可見輸卵管間質(zhì)水腫，并見有較多的炎癥細胞浸潤，A2組和A3組表現(xiàn)較重，嚴重切片上可以

4、見到炎癥細胞浸潤到上皮層內(nèi)。A0組切片及B組各組切片均未見明顯異常。 2、透射電鏡下觀察結(jié)果：在A1組、A2組及A3組的可逆性損傷主要為：部分纖毛細胞內(nèi)的線粒體出現(xiàn)輕度的水腫、空泡形成及中央有結(jié)品樣物質(zhì)形成；部分粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張并可見到電子致密物沉積；部分細胞的細胞核固縮，并且核膜間隙擴大。無纖毛細胞其細胞項部的分泌顆粒代償性增加。不可逆損傷主要是纖毛細胞纖毛減少及丟失，主要出現(xiàn)在A3組和B3組。 3、免疫組化結(jié)果

5、 (1)A組、B組的ER+++表達率分別為13.9％(5/36)和1136.1％(13/36)，B組高于A組，行四格表卡方檢驗有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。 (2)A組的ER陽性表達在不同劑鼉組的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；B組的ER陽性表達在不同劑量組的差異具也有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。兩組均表現(xiàn)為隨著MTX劑量的增加，ER陽性表達下降。 (3)A、B兩組相同劑量的小組進行比較，示1mg/kg組和2mg/k

6、g組在兩個時間點的ER表達存在明顯差異(P均＜0.05)，B組的ER陽性表達率較A組明顯有增加，5mg/kg組在兩個時間點的ER表達尚不存在明顯差異(P＞0.05)。 (4)A組的PR陽性表達在不同劑量組的差異具無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；而B組的PR陽性表達在不同劑量組的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，表現(xiàn)為隨著MTX劑量的增加，PR陽性表達下降。 (5)A、B兩組相同劑量的小組進行比較，只有2mg/kg組在兩個

7、時間點的PR表達存在明顯差異(P＜0.05)，2月組的ER陽性表達較10天組明顯有增加，1mg/kg組和5mg/kg組在兩個時間點的ER表達尚不存在明顯差異(P＞0.05)。 結(jié)論： 1、MTX對大鼠輸卵管內(nèi)膜的光鏡下?lián)p傷主要是炎癥細胞浸潤，并可以隨著時間的延長而恢復(fù)。 2、MTX對大鼠輸卵管損傷的電鏡下超微結(jié)構(gòu)的損傷是隨著劑量的增加而加重，但低劑量組的損傷遠期可逆，大劑最組的損傷在觀察時間期限內(nèi)為不可逆。