早期小肝癌與癌前病變微衛(wèi)星變異特點(diǎn)及其臨床病理學(xué)意義的研究.pdf

1、背景和目的： 肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是我國(guó)最常見的惡性腫瘤之一，因而一直是我國(guó)研究的重點(diǎn)腫瘤之一。HCC之所以目前治療效果仍不盡如人意，其中很重要的原因之一是我們至今仍不知道人體早期小HCC具有何種分子生物學(xué)特征；對(duì)早期相對(duì)良性小，HCC向晚期惡性狀態(tài)演變的分子機(jī)制的認(rèn)識(shí)尚屬空白，此種狀況也導(dǎo)致了目前對(duì)小HCC概念的混亂。 目前依據(jù)HCC瘤體大小設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)有5cm，4.5cm

2、，4cm，3.5cm，3cm，2.5cm不等，缺乏分子生物學(xué)意義上的理論依據(jù)，這種狀況嚴(yán)重影響了臨床對(duì)早期小HCC診斷與治療水平的提高，成為制約肝臟外科進(jìn)一步發(fā)展的瓶頸之一，臨床上迫切需要小HCC的新理論和新概念用于指導(dǎo)醫(yī)療實(shí)踐。 現(xiàn)代腫瘤分子生物學(xué)研究表明，腫瘤是一種基因病，是由多基因變異并長(zhǎng)期累積所致。單個(gè)基因的變異并不足以完成從正常細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化→癌前病變→早期腫瘤→晚期腫瘤的整個(gè)復(fù)雜過程，而需要一組腫瘤相關(guān)基因的連續(xù)動(dòng)態(tài)變

3、異才可以完成。顯然，從基因組不穩(wěn)定性的角度探討早期HCC形成與演進(jìn)的分子機(jī)制，有可能成為認(rèn)識(shí)早期小HCC病理生物學(xué)特性演變規(guī)律的重要突破口。 根據(jù)以上分析，本研究設(shè)計(jì)了對(duì)HCC癌前病變——異型增生結(jié)節(jié)(dysplasticnodule，DN)、微小HCC(Micro HCC，d<1cm)、小HCC(small HCC，d<3cm)和大HCC(large HCC，d>3cm)4組病變以及肝臟良性腫瘤肝細(xì)胞腺瘤(hepatocell

4、ularadenoma，HCA)進(jìn)行覆蓋6條染色體的64個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)志物的基因組不穩(wěn)定性檢測(cè)，旨在詳細(xì)探討早期HCC的分子生物學(xué)特性，并尋找具有臨床實(shí)際應(yīng)用價(jià)值的早期小HCC的微衛(wèi)星診斷譜系。 方法： 采用PCR-非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳和硝酸銀染色技術(shù)，對(duì)199例HCC中40個(gè)微衛(wèi)星多態(tài)性標(biāo)記物的2種變異特征——雜合子缺失(loos of heterozygosity，LOH)和微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(microsatellit

5、e instability，MSI)進(jìn)行檢測(cè)；應(yīng)用毛細(xì)管電泳測(cè)序技術(shù)對(duì)49例HCC、10例HCA和8例DN進(jìn)行了五條染色體臂24個(gè)位點(diǎn)的微衛(wèi)星變異檢測(cè)。各位點(diǎn)基因組不穩(wěn)定情況與臨床病理學(xué)特點(diǎn)的關(guān)系用卡方檢驗(yàn)或Fisher確切概率法進(jìn)行檢驗(yàn)，各組病變片段等位基因缺失(FAL)值比較用t-test，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論： HCC存在廣泛的微衛(wèi)星變異，一些基因座如D1S507，D4S415，D4S1538，D4S

6、406，D4S426，D8S520，D8S264，D8S277，D8S261和D16S515發(fā)生高頻LOH。其中以代表腫瘤抑制基因路徑的LOH方式在 HCC的發(fā)生和發(fā)展過程中起主要作用，代表錯(cuò)配修復(fù)基因路徑的MSI的作用次之。在一些特定染色體區(qū)的等位基因缺失與 HBV 感染、血清AFP水平、腫瘤大小、肝硬化、Edmondson分級(jí)、腫瘤包膜突破等相關(guān)。 HCA、DN在部分位點(diǎn)發(fā)生LOH，與HCC有重疊，提示在正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化為病變的