Visfatin對(duì)大鼠心室肌細(xì)胞離子通道的影響.pdf

1、Visfatin是一種由脂肪組織分泌的蛋白質(zhì)因子，血漿visfatin濃度與內(nèi)臟脂肪量成正相關(guān)，而與皮下脂肪量關(guān)系微弱。Visfatin分子量為52KDa，cDNA檢測(cè)顯示，它與以往在淋巴細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的一種被稱為前B細(xì)胞集落增強(qiáng)因子（pre-Bcellcolony-enhancingfactor,PBEF）的物質(zhì)是同一種物質(zhì)。Visfatin在內(nèi)臟脂肪組織中高表達(dá)，在骨骼肌、肝臟、骨髓及淋巴細(xì)胞中也有不同程度表達(dá)。Visfatin由內(nèi)臟白

2、色脂肪中的巨噬細(xì)胞釋放，有類似胰島素的生物學(xué)效應(yīng)，與代謝性疾病和慢性炎性疾病關(guān)系密切。近年發(fā)現(xiàn)visfatin對(duì)急性心肌缺血再灌注損傷有保護(hù)作用。多種通道電流與心肌缺血再灌注損傷有關(guān)，其中鈉鈣交換體抑制劑對(duì)心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用已得到公認(rèn)。本工作以單個(gè)大鼠心室肌細(xì)胞為模型，應(yīng)用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)，觀察visfatin對(duì)大鼠心室肌細(xì)胞鈉鈣交換電流（INa/Ca）、L型鈣通道電流（ICa，L）、ATP敏感鉀通道電流（IKATP）的作用，

3、以明確visfatin對(duì)心肌電生理的影響，并探討visfatin抗心肌缺血再灌注損傷的離子電流機(jī)制。
　　目的：本實(shí)驗(yàn)旨在研究visfatin對(duì)大鼠心室肌細(xì)胞離子電流的作用，并探討visfatin抗心肌缺血再灌注損傷的離子電流機(jī)制。
　　方法：雄性SD大鼠（250-320g），肝素抗凝后，腹腔麻醉，斷頭處死，迅速取其心臟，懸掛于Langendorff灌流系統(tǒng)，先用無鈣臺(tái)式液灌流5分鐘，再以Ⅰ型膠原酶溶液灌流心臟，待心臟基本變

4、軟后剪取心室部分，剪碎吹打使之分離成為單個(gè)心室肌細(xì)胞，放入4℃KB液中備用。使用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄心室肌細(xì)胞的INa/Ca、ICa，L、IKATP。給藥組以含不同濃度visfatin的細(xì)胞外液灌流心室肌細(xì)胞5min；對(duì)照組直接以細(xì)胞外液灌流5min，記錄并觀察電流曲線的變化。
　　結(jié)果：
　　1.Visfatin對(duì)大鼠心室肌細(xì)胞INa/Ca的影響
　　Visfatin對(duì)內(nèi)向、外向INa/Ca均有增大作用。對(duì)照組以不加

5、藥的細(xì)胞外液灌流心室肌細(xì)胞5min后，內(nèi)向鈉鈣交換電流減小了5±5％（n=8），外向鈉鈣交換電流減小了2±8%（n=8）。同樣條件下，以含有濃度分別為25nmol/L、250nmol/L、500nmol/L的visfatin的細(xì)胞外液灌流心室肌細(xì)胞5min后，其內(nèi)向鈉鈣交換電流比給藥前增大20±12%(n=6，P<0.05)，24±6%(P<0.05，n=6)，35±5%(P<0.05，n=5)。25nmol/L的visfatin使外向

6、鈉鈣交換電流比給藥前降低了2±8%（P>0.05，n=6），250nmol/L和500nmol/L的visfatin使外向鈉鈣交換電流分別比給藥前增加了6±4%（P<0.05，n=6），15±3%（P<0.05，n=5）。
　　2.Visfatin對(duì)大鼠心肌細(xì)胞ICa，L的影響
　　Visfatin可降低大鼠心肌細(xì)胞ICa，L，以visfatin濃度為250nmol/L的細(xì)胞外液灌流心肌細(xì)胞5min后，ICa，L降低了18士

7、4%（n=6），對(duì)照組由于rundown現(xiàn)象減小4士5%（n=8），給藥組與對(duì)照組相比較有顯著差異(P<0.01)。
　　3.Visfatin對(duì)大鼠心肌細(xì)胞IKATP的影響
　　在由50mV到-100mV持續(xù)125ms的斜坡刺激下記錄心肌細(xì)胞IKATP。250nmol/L的visfatin不能使該電流增加，給予吡那地爾（pinacidil）后該電流明顯增加，并且能被格列本脲（glibenclamide）阻斷（說明該電流是IK

8、ATP），提示visfatin不能使靜息狀態(tài)下心肌細(xì)胞的ATP敏感鉀通道開放。
　　結(jié)論：本工作以單個(gè)大鼠心室肌細(xì)胞為模型，應(yīng)用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，visfatin可濃度依賴性地增大心室肌細(xì)胞的內(nèi)向INa/Ca，高濃度的visfatin對(duì)外向INa/Ca也有一定增加作用。visfatin可降低ICa，L，對(duì)IKATP無作用。上述結(jié)果表明，visfatin對(duì)心臟缺血再灌注損傷的保護(hù)可能與增加內(nèi)向INa/Ca，降低ICa，L