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1、目的:明確血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)對(duì)新生大鼠心肌細(xì)胞超極化激活環(huán)核苷酸門控離子通道(HCN)電流的影響及其機(jī)制。
方法:本研究用膠原蛋白酶技術(shù)分離1-3d新生Wister大鼠心室肌獲得單一的心室肌細(xì)胞,于37℃,95% CO2的孵育箱中培養(yǎng);全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄HCN通道電流(If);提取心肌細(xì)胞膜蛋白,用Western blot檢測(cè)HCN蛋白的表達(dá)。
結(jié)果:
1.將心室肌細(xì)胞暴露于AngⅡ(10 nmol
2、/L)20min后,If顯著增大(P<0.05);
2.AngⅡ增大If電流可被酪氨酸蛋白激酶抑制劑Genistein或PP2顯著抑制;增大的HCN通道酪氨酸磷酸化水平也被減小(P<0.05);
3.用硫氧還原蛋白受體阻斷劑顯著抑制AngⅡ增大的If(P<0.05);
4.If也可被非特異性蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPs)抑制劑顯著增大(P<0.05)。
結(jié)論:AngⅡ增大If,是通過ROS依賴性的酪
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