AT1R-Calcineurin信號通路對乳鼠肥大心室肌細(xì)胞離子通道重構(gòu)的影響.pdf

1、目的：本研究通過培養(yǎng)大鼠乳鼠原代心室肌細(xì)胞，牽張（Str）刺激和苯腎上腺素（PE）刺激促心室肌細(xì)胞肥大，分別予血管緊張素II1型受體（AT1R）拮抗劑氯沙坦（Los）、鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶（Calcineurin，CaN）抑制劑環(huán)孢素（CsA）和重組腺病毒shRNA干擾載體介導(dǎo)沉默編碼CaN之A亞基β亞型（CnAβ）的基因(Ad-CnAβshRNA)等干預(yù)，研究AT1R-Calcineurin信號通路對乳鼠肥大心室肌細(xì)胞離子通道重構(gòu)的影響。<

2、br>　　方法:1天齡SD大鼠乳鼠，消化分離心室肌細(xì)胞，培養(yǎng)24h后分組干預(yù)：牽張（Str）干預(yù)實驗分組：①對照組：不予牽張刺激，培養(yǎng)26h；② Str組：牽張增加20%硅膠面積，培養(yǎng)24h；③Los+Str組：給予Los預(yù)處理2h，繼之牽張24h；④CsA+Str組：給予CsA預(yù)處理2h，繼之牽張24h。PE干預(yù)實驗分組:①對照組：不予干預(yù)，共培養(yǎng)26h；②PE組：給予 PE培養(yǎng)24h。③Los+PE組：給予Los預(yù)處理2h，繼之加入

3、PE培養(yǎng)24h。④CsA+PE組：給予CsA預(yù)處理2h，繼之加入PE培養(yǎng)24h。Ad-CnAβshRNA介導(dǎo)RNA干擾實驗分組：取MOI=50對應(yīng)的重組腺病毒，①Ad-Null組：加入腺病毒空載體，感染48h；②Ad-Null+PE組：加入腺病毒空載體，感染24h后加PE，繼續(xù)培養(yǎng)24h。③ Ad-CnAβshRNA1+PE組：加入Ad-CnAβshRNA1，感染24h后加PE，繼續(xù)培養(yǎng)24h④Ad-CnAβshRNA1組：加入Ad-C

4、nAβshRNA1，感染48h。免疫熒光和免疫組化染色鑒定心室肌細(xì)胞；免疫蛋白印跡法測定 CaN的蛋白表達(dá)；用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄心室肌細(xì)胞Ito、IK1和ICa,L等離子通道電流及動作電位。
　　結(jié)果：牽張刺激心室肌細(xì)胞 CaN蛋白表達(dá)明顯上調(diào)，而 Los、CsA明顯抑制牽張刺激的效應(yīng)。牽張刺激使心室肌細(xì)胞的Ito電流密度明顯減少，且有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異，激活無明顯的改變，失活加快，有明顯統(tǒng)計學(xué)差異；Los、CsA干預(yù)明顯抑制牽張

5、刺激干預(yù)的上述效應(yīng)。PE刺激干預(yù)心室肌細(xì)胞明顯減少心室肌細(xì)胞的Ito電流密度，激活無明顯的改變，失活加快，IK1電流密度明顯減少，ICa,L電流密度明顯增大，動作電位復(fù)極20%（APD20）、動作電位復(fù)極50%（APD50）、動作電位復(fù)極90%（APD90）明顯延長，且均有明顯統(tǒng)計學(xué)差異， 而Los、CsA和Ad-CnAβshRNA1能明顯抑制PE刺激干預(yù)的效應(yīng)。
　　結(jié)論：AT1R-Calcineurin信號通路參與調(diào)