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1、目的:研究槲皮素(Que)對培養(yǎng)的乳鼠心臟成纖維細胞的纖維連接蛋白(FN)和轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)表達的影響,探討其在心肌肥厚中可能的作用機制。 方法:1.細胞分離培養(yǎng)和鑒定:用胰酶消化法分離細胞,差速貼壁分離法獲得心肌成纖維細胞,光鏡和免疫組化的方法鑒定細胞。2.細胞增殖檢測:WST法測定細胞增殖,免疫組化方法測定心肌成纖維細胞FN及TGF-β1的表達。3.實驗分組:根據(jù)不同的藥物及藥物不同濃度,實驗共分二大部分,第
2、一部分:觀察Que對心肌成纖維細胞的影響,主要分兩個步驟:首先觀察Que對基礎(chǔ)狀態(tài)下心肌成纖維細胞增殖是否有影響,設(shè)不同濃度的Que(10-6-10-4M)組和空白對照組。第二步觀察Que對血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)刺激下心肌成纖維細胞增殖的影響,設(shè)空白對照組、AngⅡ組和不同濃度的Que(10-6-10-4M)+Ang Ⅱ組。以WST法檢測心肌成纖維細胞增殖情況。第二部分,觀察Que對FN和TGF-β1表達的影響,主要分兩個步驟:首先觀
3、察Que對基礎(chǔ)狀態(tài)下心肌成纖維細胞FN、TGF-β1表達的影響,設(shè)不同濃度的Que(10-6-10-4M)組和空白對照組。第二步觀察Que對Ang Ⅱ刺激下FN、TGF-β1表達的影響,設(shè)空白對照組、Ang Ⅱ組和不同濃度的Que(10-6-10-4M)+Ang Ⅱ組。以免疫組化方法測定心肌成纖維細胞FN和TGF-β1的表達。 結(jié)果:1.培養(yǎng)的細胞經(jīng)過光鏡和免疫組化的方法鑒定證實為心肌成纖維細胞。2.Que對心肌成纖維細胞增殖和
4、FN、TGF-β1表達的影響:①Q(mào)ue對基礎(chǔ)狀態(tài)下的成纖維細胞增殖無明顯影響,Que各濃度組(10-6-10-4M)與空白對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。②Que呈濃度依賴性的抑制AngⅡ的促增殖作用。Que各濃度組OD值明顯低于AngⅡ組(P<0.01)。③Que在基礎(chǔ)狀態(tài)下能抑制FN、TGF-β1的表達,Que各濃度組(10-6-10-4M)FN、TGF-β1均低于空白對照組(P<0.01)。④Que呈濃度依賴性的抑制A
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