人類心臟發(fā)育候選基因LRRC10的功能研究.pdf

1、心臟病嚴(yán)重地威脅著人類的健康和生命，近幾年，心臟病的死亡人數(shù)占到疾病死亡總?cè)藬?shù)的三分之一。為攻克這一頑癥，首先必須從分子水平上系統(tǒng)地研究控制心臟發(fā)育的基因及其相互調(diào)控關(guān)系。
　　 小鼠LRRC10基因在心臟組織具有大量而特異的表達(dá)，人類中也發(fā)現(xiàn)了LRRC10基因，它與小鼠的LRRC10基因在蛋白質(zhì)水平的相似性高達(dá)84％，它是一個(gè)很好的人類心臟發(fā)育候選基因。對(duì)人LRRC10基因的深入研究對(duì)于探討心臟發(fā)育的基因調(diào)控機(jī)制，對(duì)于心臟病的

2、診斷、治療具有重大的理論和實(shí)踐意義。
　　 為了研究LRRC10在心臟中的作用機(jī)制，本文從酵母雙雜交方法入手，在成人心臟文庫中篩選鑒定到6個(gè)與LRRC10發(fā)生相互作用的蛋白質(zhì)，其中FHL2是一個(gè)在心臟組織特異表達(dá)的基因。作者用免疫共沉淀和Pull-Down驗(yàn)證了LRRC10與FHL2確實(shí)發(fā)生相互作用，并以二者的相互作用為重點(diǎn)做了進(jìn)一步的研究。
　　 利用免疫熒光研究LRRC10和FHL2在COS-7細(xì)胞的定位情況發(fā)現(xiàn)，L

3、RRC10主要定位在細(xì)胞核，F(xiàn)HL2在細(xì)胞核質(zhì)均有表達(dá)，當(dāng)二者共同轉(zhuǎn)入細(xì)胞時(shí)，F(xiàn)HL2發(fā)生了趨核，二者都集中在細(xì)胞核表達(dá)。
　　 利用熒光報(bào)告基因分析初步發(fā)現(xiàn)LRRC10具有轉(zhuǎn)錄抑制活性。LRRC10-GAL4BD的過表達(dá)強(qiáng)烈抑制了GAL4 DNA結(jié)合位點(diǎn)啟動(dòng)子控制下的熒光報(bào)告基因的表達(dá)。FHL2的共同表達(dá)減弱了LRRC10的抑制作用。
　　 熒光報(bào)告基因分析發(fā)現(xiàn)LRRC10的過表達(dá)對(duì)AP-1途徑下游基因的轉(zhuǎn)錄活性具有抑