人類心臟表達新基因ZNF411和ZNF415的克隆與功能研究.pdf

1、心臟是脊椎動物器官發(fā)生過程中最早形成的結(jié)構(gòu)之一.心臟發(fā)育是一個復雜的過程,它受一系列基因的精確調(diào)控.鑒定在心臟發(fā)育過程中起調(diào)控作用的基因和分子途徑,將促進人們從分子水平認識心臟發(fā)育和先天性心臟病發(fā)生的機制.鋅指基因家族是最大的人類基因家族之一,其蛋白產(chǎn)物主要通過與DNA結(jié)合而起控制轉(zhuǎn)錄的作用.MAPK信號傳導途徑是廣泛存在于脊椎動物細胞調(diào)控的一種機制,許多轉(zhuǎn)錄因子是重要的MAPK靶分子.為了鑒定控制心臟發(fā)育和疾病發(fā)生的新基因,該研究從心

2、臟cDNA文庫中克隆了兩個人類新基因,ZNF411和ZNF415,它們都位于19號染色體上,屬于Cys2/His2型鋅指蛋白家族.Northern雜交結(jié)果表明ZNF411在心臟和骨骼肌表達而ZNF415只在心臟中強烈表達,表明這兩個基因可能對心臟發(fā)育調(diào)控起著重要作用.通過構(gòu)建增強型綠色熒光蛋白與ZNF411和ZNF415融合基因的真核表達載體,轉(zhuǎn)染COS-7細胞系,瞬時表達后熒光顯微鏡觀察了它們編碼蛋白的活細胞定位及表達,證明這兩個基因

3、均定位于細胞核,是一種核轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白因子.利用Fmoc固相多肽化學合成法合成了ZNF415基因的20個氨基酸的多肽,用兔血清免疫的方法得到了ZNF415基因的多克隆抗體,這為從免疫組織化學方面研究它的功能提供了便利.報道基因分析證明ZNF411是一個轉(zhuǎn)錄抑制因子,當ZNF411蛋白在COS-7細胞中過量表達時抑制Ap-1和SRE的活性,這表明ZNF411可能是MAPK信號途徑中的負調(diào)控因子.綜合這些結(jié)果,我們可以初步得出結(jié)論,ZNF41