小干擾RNA表達(dá)載體抑制子宮頸癌HPV16 E7基因的研究.pdf

1、Y7j2900學(xué)校代碼：學(xué)號(hào)：10610B020678四川大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)博士專業(yè)學(xué)位論文小干擾RNA表達(dá)栽體抑制子宮頸癌題目墮￡Y!垂E2基旦盟盟塞二00五年四月二十五El四川大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)博士學(xué)位論文小干擾RNA表達(dá)載體抑制子宮頸癌HPVl6E7基因的研究導(dǎo)師：彭芝蘭教授研究生：王丹青中文摘要背景與研究目的高危型HPV感染在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用，特別是E6／E7癌基因，已被證實(shí)有惡性轉(zhuǎn)化能力，因此它們已成為宮頸癌基因治療的

2、理想靶點(diǎn)。RNA干擾(RNAincerference，RNAi)是新近發(fā)展起來的一種封閉基因表達(dá)的有效方法，它比反義寡核苷酸和核酶技術(shù)能更高效的抑制目的基兇的表達(dá)。已有研究證實(shí)化學(xué)合成的siRNA(smallinterferingRNA)能高效地介導(dǎo)RNAi作用，但作用持續(xù)時(shí)間短，而采用siRNA表達(dá)載體(smallinterferingRNAexpressiOilvector)的方法可能延長(zhǎng)作用時(shí)間。因此本研究旨在探討HPVl6E7特

3、異性SfRNA表達(dá)載體對(duì)宮頸癌Caski和SiHa細(xì)胞E7基因的沉默作用及作用持續(xù)時(shí)間，以及體內(nèi)外對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，探索siRNA表達(dá)載體作為宮頸癌基因治療新策略的可行性。方法1利用計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì)軟件，設(shè)計(jì)合成了含不同HPVl6E7特異性序列的56m寡核苷酸片段，并將其定向克隆入真核表達(dá)載體psiRNA，得到重組質(zhì)粒P1、P2、P3；2利用脂質(zhì)體將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染CaSki和SiHa細(xì)胞，以熒光定量RT，PCR檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)轉(zhuǎn)染前后E7