小干擾RNA表達載體抑制子宮頸癌HPV16 E7基因的研究.pdf

1、Y7j2900學校代碼：學號：10610B020678四川大學臨床醫(yī)學博士專業(yè)學位論文小干擾RNA表達栽體抑制子宮頸癌題目墮￡Y!垂E2基旦盟盟塞二00五年四月二十五El四川大學臨床醫(yī)學博士學位論文小干擾RNA表達載體抑制子宮頸癌HPVl6E7基因的研究導師：彭芝蘭教授研究生：王丹青中文摘要背景與研究目的高危型HPV感染在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用，特別是E6／E7癌基因，已被證實有惡性轉(zhuǎn)化能力，因此它們已成為宮頸癌基因治療的

2、理想靶點。RNA干擾(RNAincerference，RNAi)是新近發(fā)展起來的一種封閉基因表達的有效方法，它比反義寡核苷酸和核酶技術(shù)能更高效的抑制目的基兇的表達。已有研究證實化學合成的siRNA(smallinterferingRNA)能高效地介導RNAi作用，但作用持續(xù)時間短，而采用siRNA表達載體(smallinterferingRNAexpressiOilvector)的方法可能延長作用時間。因此本研究旨在探討HPVl6E7特

3、異性SfRNA表達載體對宮頸癌Caski和SiHa細胞E7基因的沉默作用及作用持續(xù)時間，以及體內(nèi)外對腫瘤細胞生長的影響，探索siRNA表達載體作為宮頸癌基因治療新策略的可行性。方法1利用計算機輔助設(shè)計軟件，設(shè)計合成了含不同HPVl6E7特異性序列的56m寡核苷酸片段，并將其定向克隆入真核表達載體psiRNA，得到重組質(zhì)粒P1、P2、P3；2利用脂質(zhì)體將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染CaSki和SiHa細胞，以熒光定量RT，PCR檢測不同時間點轉(zhuǎn)染前后E7