PSMA對前列腺癌LNCaP細胞生物學行為影響的研究.pdf

1、研究背景:
　　 前列腺癌(Prostate Cancer，PCa)是西方男性最常見的惡性腫瘤之一，在我國隨著診斷水平的提高、人們生活方式的改變和人口的老齡化，發(fā)病率和死亡率逐年增高。對早期前列腺癌采用根治性手術治療效果較好，但大多數前列腺癌患者確診時已是進展期或晚期，腫瘤浸潤到前列腺外或者已有遠處轉移，對于這些患者，采用目前的治療方法效果均不佳，因此有必要尋找一種新的治療晚期前列腺癌的有效途徑。基因治療是近年來研究的熱點，隨著

2、分子生物學、分子遺傳學及細胞生物學的發(fā)展，基因治療已發(fā)展成為現代醫(yī)學的一個全新領域，基因治療有望成為晚期前列腺癌治療的一個新途徑。
　　 對前列腺癌進行基因治療需要尋找一個理想的靶點，而前列腺特異性膜抗原(Prostate Specific Membrane Antigen，PSMA)是目前研究的一個熱點。PSMA是一種前列腺癌相關抗原，由于它具有較高的特異性和位于前列腺上皮細胞膜的特性，且在前列腺癌及其轉移灶中表達增高，因此在

3、前列腺癌的早期診斷、判斷病情進展、預后以及在前列腺癌的治療中具有重大意義。PSMA在前列腺正常組織、前列腺增生組織、前列腺癌組織中的表達依次上升，在前列腺癌組織中，其表達水平與病情進展有明顯的相關性，發(fā)生轉移的、對雄激素非依賴的、Gleason評分較高的病例表達水平明顯高于未發(fā)生轉移的、對雄激素依賴的、Gleason評分低的病例，并且PSMA在腫瘤新生血管系統(tǒng)表達，而在正常組織血管內皮不表達。
　　 終上所述，我們猜測PSMA與

4、前列腺癌細胞的增殖、分裂、遷移、侵襲等行為是否存在著一定的聯(lián)系?
　　 本課題組的前期研究針對PSMA構建了shRNA慢病毒載體，轉染能高表達PSMA的前列腺癌LNCaP細胞后，通過real-time PCR檢測PSMA mRNA的表達水平，通過Western blot檢測PSMA蛋白的表達水平，發(fā)現PSMA的mRNA和蛋白均能被穩(wěn)定抑制，從而獲得了能穩(wěn)定低表達PSMA的前列腺癌LNCaP細胞。同時也培養(yǎng)了未處理的前列腺癌LNC

5、aP細胞及獲得了轉染了與人類基因無同源性、對PSMA不起干擾作用的siRNA的前列腺癌LNCaP細胞。
　　 研究目的:
　　 研究PSMA對前列腺癌LNCaP細胞生物學行為的影響，為進一步研究PSMA在前列腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中起的作用打下基礎。
　　 研究方法:
　　 實驗分組：
　　 1)PSMA基因被穩(wěn)定抑制的前列腺癌LNCaP細胞株(實驗組)；
　　 2)未進行處理的前列腺癌LNC

6、aP細胞株(空白組)；
　　 3)轉染了與人類基因無同源性、對PSMA不起干擾作用的siRNA的前列腺癌LNCaP細胞株(對照組)。
　　 以上述三組細胞為實驗對象，分別進行MTT實驗、流式檢測細胞周期、細胞劃痕實驗、Transwell實驗，從而比較不同組細胞的生物學行為的變化。MTT實驗：處理后在特定時間點測定相應的OD值，檢測不同組細胞的增殖能力，繪制生長曲線。
　　 流式檢測細胞周期：通過流式細胞儀檢測細胞

7、周期，根據處于細胞周期中S期細胞的比例，分析不同組細胞之間的分裂能力。
　　 細胞劃痕實驗：劃痕后在特定時間點進行顯微鏡下拍照，定性判斷不同組細胞的遷移能力。
　　 Transwell實驗：通過此實驗檢測不同組細胞的遷移、侵襲能力。
　　 研究結果:
　　 1.MTT實驗：處理后分別檢測12小時、24小時、36小時、48小時、60小時、72小時、84小時、96小時三組細胞OD值，繪制生長曲線，結果判斷實驗

8、組細胞的增殖生長能力較空白組、對照組降低。
　　 2.流式檢測細胞周期：實驗組S期細胞百分數較空白組及對照組的減少，實驗組G0-G1期細胞百分數較空白組及對照組的增加，說明實驗組細胞發(fā)生G0期阻滯，實驗組細胞分裂能力減弱。
　　 3.細胞劃痕實驗：劃痕后于0小時、24小時、48小時對細胞進行顯微鏡下拍照，通過觀察所劃痕跡縮窄的程度，定性判斷實驗組的細胞遷移能力弱于空白組的和對照組的，而空白組和對照組比較差別不明顯。