脊髓P2X4受體參與大鼠脛骨癌痛的可能機(jī)制.pdf

1、第一部分：脊髓P2X4受體在大鼠脛骨癌痛中的變化
　　 目的：觀察脛骨癌痛大鼠脊髓P2X4受體表達(dá)的變化
　　 方法：28只雌性SD大鼠，體重160-180g，隨機(jī)分為3組：空白對(duì)照組（K組，n=8），假手術(shù)組（J組，n=8）和模型組（M組，n=12）。空白對(duì)照組不做任何處理，假手術(shù)組左脛骨近端骨髓腔注射PBS液10μl，模型組左脛骨近端骨髓腔注射Walker256乳腺癌細(xì)胞（1×107/ml）10μl。各組均在建模前1

2、天、建模后第3、6、9、12、15、18天用Von Frey絲測定大鼠左后肢機(jī)械縮足閾值（mechanical withdrawalthreshoId，MWT），用后肢負(fù)重儀測定大鼠雙后肢負(fù)重差值?？瞻讓?duì)照組和假手術(shù)組在建模后第12天，模型組于建模后第6、12、18天各處死4只大鼠，取脊髓L4～6組織，冰凍切片，用免疫組織化學(xué)方法檢測脊髓背角P2X4受體表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果：模型組大鼠建模后第6天開始出現(xiàn)機(jī)械性痛敏，并隨著時(shí)

3、間逐漸增強(qiáng)，同時(shí)脊髓背角P2X4受體表達(dá)，P2X4受體陽性細(xì)胞數(shù)（NUM）及積分光密度值（IOD）逐漸增加，與空白對(duì)照組和假手術(shù)組相比，結(jié)果均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。
　　 結(jié)論：脊髓P2X4受體表達(dá)上調(diào)可能參與了大鼠脛骨癌痛的產(chǎn)生和維持。
　　 第二部分：鞘內(nèi)注射TNP-ATP和PPADS對(duì)脛骨癌痛大鼠脊髓背角P2X4受體及磷酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶表達(dá)的影響
　　 目的：觀察脛骨癌痛大鼠鞘內(nèi)注射TNP-A

4、TP和PPADS后，脊髓背角P2X4受體及細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（p-ERK）表達(dá)的變化，并探討其可能機(jī)制。
　　 方法：40只雌性SD大鼠，體重160～180g，隨機(jī)分為5組（n=8）：假手術(shù)組（K組）、模型組（M組）、雙蒸水組（ddH2O組）、TNP-ATP組和PPADS組。假手術(shù)組左脛骨近端骨髓腔注射PBSl0μl，其他各組左脛骨近端骨髓腔均注射Walker256乳腺癌細(xì)胞（1×107/ml）10μl。建模后第5天所有大鼠均鞘

5、內(nèi)置管，后3組自建模后第7天起，連續(xù)5天鞘內(nèi)分別注射雙蒸水，TNP-ATP（30nmol）和PPADS（100nmol）各10μl；其余兩組不進(jìn)行鞘內(nèi)注射。各組在建模前1天、建模后第3、6、9、12天用Von Frey絲測定大鼠左后肢機(jī)械縮足閾值（MWT），用后肢負(fù)重儀測大鼠雙后肢負(fù)重差值。各組大鼠均于建模后第12天取脊髓L4～6組織，冰凍切片，用免疫組織化學(xué)方法檢測脊髓P2X4受體及磷酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（p-ERK）的表達(dá)。

6、>　　 結(jié)果：鞘內(nèi)注射PPADS后，PPADS組左后肢MWT、雙后肢負(fù)重差值、脊髓P2X4受體及p-ERK的表達(dá)、陽性細(xì)胞數(shù)（NUM）、積分光密度值（IOD）均增加明顯，與假手術(shù)組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05），與模型組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）；鞘內(nèi)注射TNP-ATP后，TNP-ATP組左后肢MWT、雙后肢負(fù)重差值、脊髓P2X4受體及p-ERK的表達(dá)、陽性細(xì)胞數(shù)（NUM）、積分光密度值（IOD）均增加不明顯，與假