燈盞細(xì)辛對(duì)大鼠慢性高眼眼壓模型視神經(jīng)保護(hù)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景：青光眼是一組以視神經(jīng)凹陷性萎縮和視野缺損為共同特征的疾病，它是僅次于白內(nèi)障的全球第二位的致盲性眼病。除眼壓以外還有眾多的因素與視神經(jīng)損傷有關(guān)。燈盞細(xì)辛(ErigeronBreviscpus Hand-MazzEBHM)是一種中草藥，能夠改善微循環(huán)，保護(hù)青光眼視神經(jīng)。實(shí)驗(yàn)研究顯示其能夠?qū)Υ笫髮?shí)驗(yàn)性青光眼視神經(jīng)起保護(hù)作用，但其具體的機(jī)制仍不十分清楚。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立大鼠慢性高眼壓模型，用燈盞細(xì)辛進(jìn)行保護(hù)性治療，探討其可能的作用機(jī)制。

2、 第一部分 目的建立大鼠慢性高眼壓模型，觀察不同時(shí)期的眼壓變化以及視神經(jīng)的損傷情況和玻璃體中游離谷氨酸濃度的變化，初步探討青光眼視神經(jīng)損傷的機(jī)制。 材料和方法選用健康成年Wistar大鼠40只，分為4組。用波長(zhǎng)為532nm的氪離子黃綠激光光凝大鼠右眼小梁網(wǎng)，光凝前測(cè)量一次眼壓，以后每周測(cè)量眼壓。在第3、6、9周處死第1、2、3組大鼠做全視網(wǎng)膜鋪片，1[％]甲苯氨藍(lán)染色，記數(shù)平均視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(retinal

3、ganglioncells,RGCs)密度；取20/μl玻璃體用高效液相色譜分析儀測(cè)量游離谷氨酸鹽濃度。第4組大鼠，第6周開(kāi)始用0.25[％]貝特舒滴實(shí)驗(yàn)眼2次/天，在第9周時(shí)處死大鼠做視網(wǎng)膜鋪片，1[％]甲苯氨藍(lán)染色，記數(shù)平均視網(wǎng)膜RGCs密度，取玻璃體采用鄰苯二甲醛柱前衍生法測(cè)量谷氨酸鹽濃度。 結(jié)果 1．眼壓所有光凝眼眼壓均升高，對(duì)照眼平均眼壓為13.25±4.10mmHg，光凝眼在第1、3、6、9周時(shí)平均眼壓分別為25.

4、65±3.84 mmHg，27.64±4.28 mmHg，24.56±4.12 mmHg，22.10±3.85 mmHg，與對(duì)照眼比較P值分別為0.015，0.018，0.020，0.03；差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；使用了0.25[％]貝特舒滴實(shí)驗(yàn)眼后在第9周時(shí)平均眼壓下降為14.90±3.45 mmHg，與對(duì)照眼比較P=0.75，差別無(wú)顯著性。2．全視網(wǎng)膜鋪片甲苯胺藍(lán)染色，視網(wǎng)膜RGCs密度值(個(gè)/mm<'2>)對(duì)照眼為2516±196，在3

5、、6、9周分別為2124±108，1865±136，165±125與對(duì)照眼比較P值分別為0.035，0.027，0.020，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；降眼壓治療組在第9周時(shí)RGCs密度值為1768±130，與對(duì)照眼比較差別有顯著性，P=0.022。3．玻璃體游離谷氨酸鹽濃度對(duì)照眼為18.32±2.3μM，在第3、6、9、周分別為20.10±2.45μM，22.35±2.75μM，23.56±2.80μM，與對(duì)照組比較，P值分別為0.25，0.2

6、0，0.15，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；降低眼壓治療組在第9周游離谷氨酸鹽濃度19.45±2.50μM，分別與對(duì)照眼比較，P=0.32，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論1．激光光凝大鼠小梁網(wǎng)后，光凝眼眼壓中等程度升高，成功建立了大鼠慢性高眼壓模型；2．大鼠慢性高眼壓模型視神經(jīng)損害，表現(xiàn)在視網(wǎng)膜RGCs密度值逐漸下降；大鼠眼壓升高后，玻璃體中游離谷氨酸鹽濃度變化不明顯；3．從第6周開(kāi)始控制實(shí)驗(yàn)眼眼壓，但視神經(jīng)損害仍然繼續(xù)，RGCs密度值下降，但

7、與不控制眼壓的第3組比較，RGCs密度值較高，控制眼壓能部分保護(hù)視神經(jīng)的損害；控制眼壓組玻璃體中游離谷氨酸鹽濃度無(wú)明顯變化；4．大鼠慢性高眼壓模型視神經(jīng)損害可能與壓力誘導(dǎo)的損傷有關(guān)；5．大鼠慢性高眼壓模型中玻璃體中游離的谷氨酸濃度無(wú)明顯變化。 第二部分 目的建立大鼠慢性高眼壓模型，觀察燈盞細(xì)辛對(duì)眼壓升高誘導(dǎo)視神經(jīng)損傷的保護(hù)作用 材料和方法選用健康成年wistar。大鼠40只，分為4組。用波長(zhǎng)為532nm的氪離子黃

8、綠激光光凝第l、2、3組大鼠雙眼小梁網(wǎng)，建立大鼠高眼壓模型。在眼壓升高后l周開(kāi)始用燈盞細(xì)辛對(duì)第2、3組大鼠15mg100g肌肉注射。第3組大鼠在第6周開(kāi)始用0.25[％]貝特舒滴實(shí)驗(yàn)眼2次/天，控制眼壓。第1組作為光凝對(duì)照組，第4組大鼠作為正常對(duì)照組。在第9周同時(shí)處死4組大鼠做全視網(wǎng)膜鋪片，l[％]甲苯氨藍(lán)染色，記數(shù)平均視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(retinal ganglion cells,RGCs)密度；取20μl玻璃體用高效液相色譜分析儀(

9、HLCA)測(cè)量游離谷氨酸鹽濃度。 結(jié)果1、眼壓所有光凝眼眼壓均中等程度升高，光凝前眼壓為14.70±3.2mHg(X±SD)：①第1組大鼠光凝后第3，6，9周眼壓分別為27.25±4.75 mHg；28.75±6.24mHg；25.47±5.60mmHg。與光凝前比較，p值分別為0.010；0.008和0.012。②第2組大鼠光凝后第3、6、9周眼壓28.15±5.25 mHg；29.45±5.15mHg； 26.40±5.3

10、5mmHg。與光凝前比較0.009，0.008和0.011③第3組大鼠光凝后第3， 6周眼壓分別為29.85±5.10mmHg；29.16±4.70 mHg。在第6周開(kāi)始用0.25％貝特舒滴實(shí)驗(yàn)眼2次/天控制眼壓，在第9周時(shí)眼壓為14.15±4.36mmHg。與光凝前比較p值分別為0.009；0.009和0.65。2、視網(wǎng)膜RGCs密度變化：全視網(wǎng)膜鋪片甲苯胺藍(lán)染色，視網(wǎng)膜RGCs密度值(個(gè)/mm<'2>)，第1組大鼠為1654±136

11、，第4組大鼠視網(wǎng)膜RGCs密度值為2516±196。①第2、3組大鼠視網(wǎng)膜RGCs密度值分別為1875±156和2135±125，與光凝對(duì)照組進(jìn)行比較，視網(wǎng)膜RGCs密度值明顯升高，差別有顯著性，P分另0為0.025并口0.045；②同樣用燈盞細(xì)辛保護(hù)治療后，第3組大鼠控制眼壓后視網(wǎng)膜RGCs密度值明顯比未控制眼壓組的第2組高，差別有顯著性，P=0.049；③第2、3組大鼠視網(wǎng)膜RGCs密度值與正常大鼠視網(wǎng)膜RGCs密度值2516±19

12、6比較，仍然明顯下降，差別有顯著性，其P值分別為0.035和0.046。3、玻璃體中游離谷氨酸鹽濃度①第1組和4組大鼠谷氨酸鹽濃度分別為23.56±2.80μM和18.32±2.30μ M②用燈盞細(xì)辛進(jìn)行視神經(jīng)保護(hù)性治療后，玻璃體中游離谷氨酸鹽濃度第2組為21.25±2.25μ M，與第1和第4組大鼠的谷氨酸鹽濃值比較，游離谷氨酸鹽濃度變化不明顯，差別無(wú)顯著性，P值分別為0.25，0.30；③第3組大鼠在用燈盞細(xì)辛治療的同時(shí)在第6周滴0

13、.25％貝特舒滴實(shí)驗(yàn)眼2次/天控制眼壓，大鼠玻璃體中游離谷氨酸鹽濃度為20.50±2.65μ與第1和第4組大鼠的谷氨酸鹽濃值比較，游離谷氨酸鹽濃度變化不明顯，P值分別為0.30，0.32。 結(jié)論 1、光凝大鼠小梁網(wǎng)成功建立大鼠慢性高眼壓模型，光凝眼眼壓中等程度升高；燈盞細(xì)辛治療后，大鼠RGC平均密度較未治療組明顯升高，第3組大鼠在控制眼壓后RGC平均密度值較第2組增高，但均較正常大鼠RGC平均密度值低，燈盞細(xì)辛能夠?qū)Υ笫舐愿?/p>