異丙酚對大鼠急性高眼壓模型的視神經(jīng)保護作用的研究.pdf

1、目的：青光眼的病理基礎是視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞(retina ganglion cells，RGCs)的進行性病理死亡。而RGC的死亡常導致視功能發(fā)生不可逆性損害。青光眼視神經(jīng)節(jié)細胞死亡的發(fā)病機制尚不明確。研究證實，免疫學因素參與了青光眼視神經(jīng)病變的病理生理過程，而視網(wǎng)膜固有的免疫活性細胞--小膠質細胞更是近來研究的焦點?；罨蟮男∧z質細胞對視神經(jīng)具有一定的保護作用，但也具有細胞毒性效應。體外培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，在缺血或者升高靜水壓的環(huán)境中，激活的小膠

2、質細胞通過增加腫瘤壞死因子α(TNFα)的合成促進了視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的凋亡。
　　 異丙酚是一種新型靜脈麻醉藥。近年研究表明異丙酚對腦、心臟等的缺血再灌注損傷有較強的保護作用。它能顯著抑制大鼠腦缺血再灌注時TNFα的產(chǎn)生和釋放，保護腦組織[6]。國內外關于異丙酚對高眼壓視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的作用罕見報道，而對急性高眼壓視網(wǎng)膜小膠質細胞及TNFα表達的影響未見報道。
　　 本實驗擬通過建立大鼠急性高眼壓模型，早期應用異丙酚，觀

3、察視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的形態(tài)，采用免疫組化及計算機圖像分析技術半定量測定視網(wǎng)膜中小膠質細胞及TNFα的表達，探討異丙酚對視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的保護機制，為臨床應用提供實驗理論依據(jù)，旨在探討青光眼視神經(jīng)損傷治療的新方法。
　　 方法：選取清潔級健康成年SD大鼠（河北醫(yī)科大學實驗動物中心提供）35只，雌雄不限，體重200±20g，無眼疾。隨機分為正常對照組5只（5只眼）即右眼，損傷對照組15只（15只眼）即右眼高眼壓+生理鹽水腹腔注射組，異

4、丙酚治療組15只（15只眼）即右眼高眼壓+異丙酚腹腔注射組。損傷對照組和異丙酚治療組再按右眼高眼壓后注射時間隨機分為2h、48h和72h3小組，每小組5只。治療組分別于右眼高眼壓后2h、48h和72h給予異丙酚0.2ml(100mg/ml)消毒后腹腔注射，即20mg/鼠。損傷對照組相應的給予生理鹽水0.2ml消毒后腹腔注射。各組大鼠均注射后6小時采用空氣栓塞法處死，隨即完整取出眼球及眶內視神經(jīng)，固定，包埋，切片，用于HE染色后光鏡下視網(wǎng)

5、膜形態(tài)學變化的觀察和視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞計數(shù)、免疫組化分析小膠質細胞和TNFα在視網(wǎng)膜的表達情況。在同一光線強度、同一放大倍數(shù)，每張切片隨機選取10個視野用計算機-圖象分析儀將免疫組化切片圖象通過圖象采集系統(tǒng)輸入計算機，采用多功能真彩色細胞圖象分析管理系統(tǒng)(Image-ProPlus6.0)對圖象中的陽性反應部位進行平均光密度分析，以陽性細胞染色的平均光密度值來表示抗原表達量。所得實驗數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件分析，單因素多組間的比較

6、用單因素方差分析，兩兩比較用q檢驗。
　　 結果：
　　 1、HE染色的視網(wǎng)膜切片形態(tài)觀察和視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞計數(shù)高眼壓損傷后2小時損傷組、治療組較正常組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞病理形念無明顯改變，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞細胞大小一致，輪廓規(guī)則，核清晰，細胞邊界清楚，未見空泡變性。視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)纖維層、內叢狀層輕度水腫。48小時損傷組、治療組較正常組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞大小不一，輪廓不規(guī)則，核深染，部分神經(jīng)節(jié)纖維神層發(fā)生空泡變性。視網(wǎng)膜水腫減輕

7、。72小時損傷組、治療組較正常組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞大小不一，輪廓不規(guī)則，部分胞核體積縮小，染色加深，呈核固縮形態(tài)，空泡變性加重，結構較紊亂。48小時、72小時治療組的視網(wǎng)膜病理改變較同時間點損傷組明顯減輕。2小時、48小時、72小時損傷組、治療組較正常組視網(wǎng)膜各層厚度末見明顯變化。(圖1-5)正常組切片每×400光鏡視野平均視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)30.4018個，損傷組2h、48h、72h每×400光鏡視野平均視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)分別為28.6

8、498個、23.7103個、16.7655個。治療組2h、48h、72h每×200光鏡視野平均視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)分別為29.4226個、26.0862個、19.7345個。2小時三組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞個數(shù)無顯著差異性(P＞0.05)。治療組48小時、72小時視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞個數(shù)均高于對應時間點損傷組，有顯著差異性(P＜0.05)。2小時、48小時、72小時兩組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)隨時間推移遞減，有顯著差異性(P＜0.05)。(Table1)

9、2視網(wǎng)膜小膠質細胞免疫組化染色正常組的視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層、內、外叢狀層及外核層均有少量表達，外核層的陽性細胞分布占主體，可見小膠質細胞淡染，呈棕黃色。損傷組和治療組可見活化的小膠質細胞數(shù)量增加。
　　 2、正常組視網(wǎng)膜小膠質細胞平均光密度值0.1528，損傷組2h、48h、72h視網(wǎng)膜小膠質細胞平均光密度值分別為0.2024、0.2581、0.3514。治療組2h、48h、72h視網(wǎng)膜小膠質細胞平均光密度值分別為0.1709、0.

10、2309、0.2962。除2小時治療組視網(wǎng)膜小膠質細胞平均光密度值較正常組無顯著差異(P＞0.05)，其余各個小組視網(wǎng)膜小膠質細胞平均光密度值較正常組有顯著差異(P＜0.05)。治療組2小時、48小時、72小時視網(wǎng)膜小膠質細胞平均光密度值均低于對應時間點損傷組，有顯著差異性(P＜0.05)。2小時、48小時、72小時兩組視網(wǎng)膜小膠質細胞平均光密度值隨時間推移遞增，有顯著差異性(P＜0.05)。(Table2)3視網(wǎng)膜TNFα免疫組化染色

11、視網(wǎng)膜TNFα表達部位呈棕黃色。正常組TNFα表達較少，損傷組和治療組可見TNFα表達增強，主要散布于視網(wǎng)膜內、外叢狀層及外核層，其他各層無明顯陽性表達。
　　 3、正常組視網(wǎng)膜免疫組化切片中表達的TNFα平均光密度值0.2018，損傷組2h、48h、72h視網(wǎng)膜TNFα平均光密度值分別為0.2498、0.3103、0.3655。治療組2h、48h、72h視網(wǎng)膜TNFα平均光密度值分別為0.2226、0.2862、0.3345。

12、除2小時治療組視網(wǎng)膜TNFα平均光密度值較正常組無顯著差異(P＞0.05)，其余各個小組視網(wǎng)膜TNFα平均光密度值較正常組有顯著差異(P＜0.05)。治療組2小時、48小時、72小時視網(wǎng)膜TNFα平均光密度值均低于對應時間點損傷組，有顯著差異性(P＜0.05)。2小時、48小時、72小時兩組視網(wǎng)膜TNFα平均光密度值隨時間推移遞增，有顯著差異性(P＜0.05)。（Table3）
　　 結論：
　　 1、小膠質細胞及腫瘤壞