異丙酚對大鼠急性高眼壓模型的視神經保護作用的研究.pdf

1、目的：青光眼的病理基礎是視網膜神經節(jié)細胞(retina ganglion cells，RGCs)的進行性病理死亡。而RGC的死亡常導致視功能發(fā)生不可逆性損害。青光眼視神經節(jié)細胞死亡的發(fā)病機制尚不明確。研究證實，免疫學因素參與了青光眼視神經病變的病理生理過程，而視網膜固有的免疫活性細胞--小膠質細胞更是近來研究的焦點?；罨蟮男∧z質細胞對視神經具有一定的保護作用，但也具有細胞毒性效應。體外培養(yǎng)發(fā)現，在缺血或者升高靜水壓的環(huán)境中，激活的小膠

2、質細胞通過增加腫瘤壞死因子α(TNFα)的合成促進了視網膜神經節(jié)細胞的凋亡。
　　 異丙酚是一種新型靜脈麻醉藥。近年研究表明異丙酚對腦、心臟等的缺血再灌注損傷有較強的保護作用。它能顯著抑制大鼠腦缺血再灌注時TNFα的產生和釋放，保護腦組織[6]。國內外關于異丙酚對高眼壓視網膜神經節(jié)細胞的作用罕見報道，而對急性高眼壓視網膜小膠質細胞及TNFα表達的影響未見報道。
　　 本實驗擬通過建立大鼠急性高眼壓模型，早期應用異丙酚，觀

3、察視網膜神經節(jié)細胞的形態(tài)，采用免疫組化及計算機圖像分析技術半定量測定視網膜中小膠質細胞及TNFα的表達，探討異丙酚對視網膜神經節(jié)細胞的保護機制，為臨床應用提供實驗理論依據，旨在探討青光眼視神經損傷治療的新方法。
　　 方法：選取清潔級健康成年SD大鼠（河北醫(yī)科大學實驗動物中心提供）35只，雌雄不限，體重200±20g，無眼疾。隨機分為正常對照組5只（5只眼）即右眼，損傷對照組15只（15只眼）即右眼高眼壓+生理鹽水腹腔注射組，異

4、丙酚治療組15只（15只眼）即右眼高眼壓+異丙酚腹腔注射組。損傷對照組和異丙酚治療組再按右眼高眼壓后注射時間隨機分為2h、48h和72h3小組，每小組5只。治療組分別于右眼高眼壓后2h、48h和72h給予異丙酚0.2ml(100mg/ml)消毒后腹腔注射，即20mg/鼠。損傷對照組相應的給予生理鹽水0.2ml消毒后腹腔注射。各組大鼠均注射后6小時采用空氣栓塞法處死，隨即完整取出眼球及眶內視神經，固定，包埋，切片，用于HE染色后光鏡下視網

5、膜形態(tài)學變化的觀察和視網膜神經節(jié)細胞計數、免疫組化分析小膠質細胞和TNFα在視網膜的表達情況。在同一光線強度、同一放大倍數，每張切片隨機選取10個視野用計算機-圖象分析儀將免疫組化切片圖象通過圖象采集系統(tǒng)輸入計算機，采用多功能真彩色細胞圖象分析管理系統(tǒng)(Image-ProPlus6.0)對圖象中的陽性反應部位進行平均光密度分析，以陽性細胞染色的平均光密度值來表示抗原表達量。所得實驗數據采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件分析，單因素多組間的比較

6、用單因素方差分析，兩兩比較用q檢驗。
　　 結果：
　　 1、HE染色的視網膜切片形態(tài)觀察和視網膜神經節(jié)細胞計數高眼壓損傷后2小時損傷組、治療組較正常組視網膜神經節(jié)細胞病理形念無明顯改變，視網膜神經節(jié)細胞細胞大小一致，輪廓規(guī)則，核清晰，細胞邊界清楚，未見空泡變性。視網膜神經節(jié)纖維層、內叢狀層輕度水腫。48小時損傷組、治療組較正常組視網膜神經節(jié)細胞大小不一，輪廓不規(guī)則，核深染，部分神經節(jié)纖維神層發(fā)生空泡變性。視網膜水腫減輕

7、。72小時損傷組、治療組較正常組視網膜神經節(jié)細胞大小不一，輪廓不規(guī)則，部分胞核體積縮小，染色加深，呈核固縮形態(tài)，空泡變性加重，結構較紊亂。48小時、72小時治療組的視網膜病理改變較同時間點損傷組明顯減輕。2小時、48小時、72小時損傷組、治療組較正常組視網膜各層厚度末見明顯變化。(圖1-5)正常組切片每×400光鏡視野平均視網膜神經節(jié)細胞數30.4018個，損傷組2h、48h、72h每×400光鏡視野平均視網膜神經節(jié)細胞數分別為28.6

8、498個、23.7103個、16.7655個。治療組2h、48h、72h每×200光鏡視野平均視網膜神經節(jié)細胞數分別為29.4226個、26.0862個、19.7345個。2小時三組視網膜神經節(jié)細胞個數無顯著差異性(P＞0.05)。治療組48小時、72小時視網膜神經節(jié)細胞個數均高于對應時間點損傷組，有顯著差異性(P＜0.05)。2小時、48小時、72小時兩組視網膜神經節(jié)細胞數隨時間推移遞減，有顯著差異性(P＜0.05)。(Table1)

9、2視網膜小膠質細胞免疫組化染色正常組的視網膜神經纖維層、內、外叢狀層及外核層均有少量表達，外核層的陽性細胞分布占主體，可見小膠質細胞淡染，呈棕黃色。損傷組和治療組可見活化的小膠質細胞數量增加。
　　 2、正常組視網膜小膠質細胞平均光密度值0.1528，損傷組2h、48h、72h視網膜小膠質細胞平均光密度值分別為0.2024、0.2581、0.3514。治療組2h、48h、72h視網膜小膠質細胞平均光密度值分別為0.1709、0.

10、2309、0.2962。除2小時治療組視網膜小膠質細胞平均光密度值較正常組無顯著差異(P＞0.05)，其余各個小組視網膜小膠質細胞平均光密度值較正常組有顯著差異(P＜0.05)。治療組2小時、48小時、72小時視網膜小膠質細胞平均光密度值均低于對應時間點損傷組，有顯著差異性(P＜0.05)。2小時、48小時、72小時兩組視網膜小膠質細胞平均光密度值隨時間推移遞增，有顯著差異性(P＜0.05)。(Table2)3視網膜TNFα免疫組化染色

11、視網膜TNFα表達部位呈棕黃色。正常組TNFα表達較少，損傷組和治療組可見TNFα表達增強，主要散布于視網膜內、外叢狀層及外核層，其他各層無明顯陽性表達。
　　 3、正常組視網膜免疫組化切片中表達的TNFα平均光密度值0.2018，損傷組2h、48h、72h視網膜TNFα平均光密度值分別為0.2498、0.3103、0.3655。治療組2h、48h、72h視網膜TNFα平均光密度值分別為0.2226、0.2862、0.3345。

12、除2小時治療組視網膜TNFα平均光密度值較正常組無顯著差異(P＞0.05)，其余各個小組視網膜TNFα平均光密度值較正常組有顯著差異(P＜0.05)。治療組2小時、48小時、72小時視網膜TNFα平均光密度值均低于對應時間點損傷組，有顯著差異性(P＜0.05)。2小時、48小時、72小時兩組視網膜TNFα平均光密度值隨時間推移遞增，有顯著差異性(P＜0.05)。（Table3）
　　 結論：
　　 1、小膠質細胞及腫瘤壞