線粒體靶向性抗氧化肽SS-31對(duì)大鼠慢性高眼壓模型視神經(jīng)損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的:研究線粒體靶向性抗氧化肽SS-31對(duì)SD大鼠慢性高眼壓模型視神經(jīng)損傷的保護(hù)作用及可能的機(jī)制，為青光眼視神經(jīng)保護(hù)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:將45只成年雄性無(wú)眼病清潔級(jí)SD大鼠隨機(jī)分為五組，A組:青光眼組、B組:青光眼+生理鹽水組、C組:青光眼+SS-31干預(yù)組、D組:正常組、E組:正常組+SS-31組，每組9只。A、B、C組每只SD大鼠右眼接受10μm聚苯乙烯微球前房注射5μL，前四周每周一次，四周后每?jī)芍芤淮沃恋诹?，建立?/p>

2、性高眼壓模型。第一次前房注射聚苯乙烯微球術(shù)后第五天使用Tonolab眼壓計(jì)測(cè)量大鼠眼壓，其后每三天測(cè)量一次。建立慢性高眼壓模型成功之后，每天予以C、E組大鼠按SS-31(3mg/kg)腹腔注射六周，而B(niǎo)組予以同等體積的0.9％生理鹽水腹腔注射六周，六周時(shí)行視網(wǎng)膜電圖（electroretinogram，ERG）和閃光視覺(jué)誘發(fā)電位(Flash-visual evokedpotential，F(xiàn)-VEP)檢查，其后處死大鼠取右眼球分別制作石蠟

3、切片、提取視網(wǎng)膜蛋白。HE染色觀察各組距視乳頭1.5mm處的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞復(fù)合體厚度(ganglion cell complex，GCC)、TUNEL法檢測(cè)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層(ganglion cell layer，GCL)細(xì)胞凋亡率(apoptosis index，AI)、western blot印跡法檢測(cè)視網(wǎng)膜胞質(zhì)細(xì)胞色素c(cytochrome c cyt c)蛋白表達(dá)情況、免疫組化及western bolt印跡法檢測(cè)視網(wǎng)膜B細(xì)

4、胞淋巴瘤-2蛋白（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）、BCL-2相關(guān)X蛋白(BCL2-associated X protein，Bax)表達(dá)情況。
　　結(jié)果:(1)A、B、C組大鼠接受聚苯乙烯微球前房注射后眼壓較未前房注射大鼠（即D組和E組）明顯升高(P＜0.05)，A、B、C組組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，D、E組組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(2)ERG檢查記錄各組大鼠a波、b波振幅值，F(xiàn)-VEP檢查記錄N1-P1振幅值。發(fā)現(xiàn)A

5、組a波、b波振幅值及N1-P1振幅值較D組明顯降低(P＜0.05)，C組大鼠經(jīng)SS-31干預(yù)后，a波、b波振幅值及N1-P1振幅值較A組有所回升，而A與B組間，D與E組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(3)HE染色發(fā)現(xiàn)，與D組大鼠距視乳頭1.5mm處的視網(wǎng)膜GCC厚度相比，A組大鼠距視乳頭1.5mm處的視網(wǎng)膜GCC厚度明顯變薄(P＜0.05)，C組大鼠經(jīng)SS-31干預(yù)后GCC厚度較A組明顯增厚，而A與B組間，D與E組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(4)TUNEL檢測(cè)

6、發(fā)現(xiàn)A組大鼠視網(wǎng)膜GCL細(xì)胞AI明顯高于D組(P＜0.05)，C組大鼠經(jīng)SS-31干預(yù)后視網(wǎng)膜GCL細(xì)胞AI明顯低于A組，而A與B組間，D與E組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(5)Westem Blot印跡檢測(cè)發(fā)現(xiàn)A組視網(wǎng)膜胞質(zhì)cyt c表達(dá)較D組顯著提高(P＜0.05)，C組大鼠經(jīng)SS-31干預(yù)后視網(wǎng)膜胞質(zhì)cyt c表達(dá)明顯低于A組，而A與B組間，D與E組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(6)Envision免疫組化和Western Blot印跡法定性、定量檢測(cè)視

7、網(wǎng)膜Bax、Bcl-2的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)A組大鼠視網(wǎng)膜Bax表達(dá)明顯高于D組(P＜0.05)，同時(shí)Bcl-2表達(dá)明顯低于D組(P＜0.05)，C組經(jīng)SS-31干預(yù)后，與A組相比，Bax表達(dá)降低，Bcl-2表達(dá)增加，而A與B組間，D與E組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:SS-31能抑制線粒體釋放cyt c到胞質(zhì)中，增加Bcl-2表達(dá)的同時(shí)降低Bax表達(dá)，抑制視網(wǎng)膜GCL細(xì)胞凋亡，對(duì)大鼠視網(wǎng)膜起到保護(hù)作用，同時(shí)視覺(jué)電生理檢查發(fā)現(xiàn)SS-31對(duì)