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文檔簡介
1、目的:通過觀察辛伐他對鈦顆粒刺激人單個(gè)核細(xì)胞釋放腫瘤壞死因子、單核細(xì)胞趨化蛋白及其對破骨細(xì)胞形成的影響,分析該過程中辛伐他汀對磷酸化p42/p44激酶表達(dá)的影響,評(píng)價(jià)辛伐他汀在防治人工關(guān)節(jié)無菌性松動(dòng)中的作用。
方法:抽取成年健康志愿者外周血45ml,分層液梯度離心法分離獲得外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),制成密度為5×108個(gè)/ mL的細(xì)胞懸液,根據(jù)干預(yù)試劑
2、不同隨機(jī)分為 5組。A組:PBMC+鈦顆粒組;B、C、D、E組在A組的基礎(chǔ)上分別加入濃度為1×10-5、1×10-6、1×10-7mmol/L的辛伐他汀及20 μmol/L的U0126。取培養(yǎng)24 h 后上清液檢測腫瘤壞死因子-a(TNF-a)及單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)的含量。分別于培養(yǎng)10、 18 d 后進(jìn)行TRAP 染色陽性細(xì)胞計(jì)數(shù),采用掃描電鏡檢測骨磨片的吸收陷窩,觀察辛伐他汀對鈦顆粒誘導(dǎo)單核細(xì)形成破骨細(xì)胞的影響。取培養(yǎng)
3、2小時(shí)的單核細(xì)胞,分組同前,用辛伐他汀及 20 μmol/L U0126 干預(yù) 60 min 后,再用 0.01[%] 鈦顆粒懸液分別刺激培養(yǎng)60 min,采用Western blot檢測細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(Extracellularsignal regulated-kinases,ERK1/2)的表達(dá)水平。初步討論MAPK 通路在人工關(guān)節(jié)無菌性松動(dòng)中作用。
結(jié)果:培養(yǎng)第3天,單核細(xì)胞逐漸變大,9天時(shí)有破骨細(xì)胞及其前體細(xì)胞
4、形成,呈圓形,但破骨細(xì)胞體積較小,核較少;18天時(shí)破骨細(xì)胞形狀不規(guī)則,體積增大,胞核明顯增多;辛伐他汀明顯抑制單核細(xì)胞向破骨細(xì)胞的分化。SEM 結(jié)果:檢查發(fā)現(xiàn)骨磨片上有吸收陷窩形成,骨吸收陷窩邊緣整齊,底部不平;A、B、C、D、E組TNF-a OD 值分別為1.1155±0.2436,0.6936±0.3543;0.6957±0.3873;0.71638±0.4789;0.2635±0.1016;MCP-1 OD 值分別為1.4210±
5、0.1053;0.9151±0.4113;1.0035±0.4642;1.102±0.3539;0.2713±0.1451;A組與其他組細(xì)胞因子比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);E與B、C、D、組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),B、C、D組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。刺激培養(yǎng) 30 min 時(shí)A、 B、 C、 D、 E組 ERK1/2 開始表達(dá),含量很低;60 min 時(shí) A、 B、 C、D、 E組 ERK1/2 含量分別為
6、 1.6121±0.0682、 1.0781±0.0728、 1.2687±0.2231、 1.4397±0.1801、0.7320±0.1104,組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
結(jié)論:鈦顆粒誘導(dǎo)人單核細(xì)胞釋放大量的TNF-α、 MCP-1,ERK1/2 通路是磨屑誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞生成T NF-a和MCP-1的主要通路,辛伐他汀可通過 ERK1/2 通路抑制TNF-α、 MCP-1的釋放,使形成破骨細(xì)胞的數(shù)量明顯
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