巨噬細(xì)胞移動抑制因子在無菌性松動人工髖關(guān)節(jié)中的表達(dá)和作用機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　人工髖關(guān)節(jié)置換術(shù)后假體不可避免會出現(xiàn)磨損,磨損顆粒會引發(fā)人工關(guān)節(jié)周圍的炎癥反應(yīng),導(dǎo)致假體松動。巨噬細(xì)胞移動抑制因子(MIF)是一種重要的促炎性細(xì)胞因子,能夠上調(diào)腫瘤壞死因子α等炎癥因子的合成和釋放,從而調(diào)控炎癥過程。MIF是否也參與調(diào)控人工髖關(guān)節(jié)無菌性松動的炎癥反應(yīng)過程,以及其具體調(diào)控機(jī)制目前尚不明確。因此我們進(jìn)行系列實(shí)驗(yàn),以進(jìn)一步研究MIF在松動人工髖關(guān)節(jié)的炎癥反應(yīng)過程中的作用。
　　研究方法:
　　首先

2、,取人工髖關(guān)節(jié)假體無菌性松動患者的界膜組織和股骨頸新鮮骨折的髖關(guān)節(jié)滑膜組織各15例。檢測MIF表達(dá)情況。
　　其次,飼養(yǎng)BALB/C小鼠,在背部造就空氣囊模型,分為4組。第1組作為對照組,氣囊內(nèi)注射入PBS液體。第2組氣囊內(nèi)注射入鈦顆?；鞈乙汉蚉BS液體。第3組氣囊內(nèi)注射入鈦顆?；鞈乙汉蚆IF中和性抗體。第4組氣囊內(nèi)注射入鈦顆?；鞈乙汉托∈驣gG。48小時后處死小鼠。檢測MIF和MMP13水平。
　　最后,RAW264.7細(xì)

3、胞用DMEM培養(yǎng)。用不同濃度鈦顆粒刺激以及用PDTC阻斷。在不同時間點(diǎn)檢測MIF表達(dá)情況;不同時間點(diǎn)檢測NF-κB活化情況;不同時間點(diǎn)檢測IκB水平。
　　結(jié)果:
　　第一,與對照組滑膜組織比較,界膜組織表達(dá)的MIF水平顯著性增多。界膜組織中表達(dá)MIF的巨噬細(xì)胞數(shù)量和成纖維細(xì)胞數(shù)量明顯多于對照組。
　　第二,鈦顆粒刺激的小鼠氣囊壁厚度和炎癥細(xì)胞數(shù)量明顯大于PBS對照組;使用MIF中和性抗體處理后,能夠明顯抑制鈦顆粒刺激

4、后氣囊壁增厚和炎癥細(xì)胞數(shù)量,而使用小鼠的IgG抗體后沒有起抑制作用。鈦顆粒刺激后氣囊壁組織中MIF水平明顯比PBS對照組升高。鈦顆粒刺激后基質(zhì)金屬蛋白酶13的水平比PBS對照組明顯升高,并且活性升高;使用MIF中和性抗體處理后,能夠使基質(zhì)金屬蛋白酶13的蛋白量明顯降低,并且活性降低,而使用小鼠的IgG抗體處理后,卻沒有這種抑制作用。鈦顆粒刺激后氣囊壁組織中ICTP含量比PBS對照組顯著性升高,使用MIF中和性抗體處理后,能夠使鈦顆粒刺激

5、的氣囊壁組織中ICTP含量明顯降低,而使用小鼠的IgG抗體處理后,卻沒有這種作用。
　　第三,隨著鈦顆粒濃度的增加,鈦顆粒刺激巨噬細(xì)胞后,表達(dá)的MIF逐漸增多,使用NF-κB的特異性抑制劑PDTC后MIF的表達(dá)明顯被抑制。0.1％濃度鈦顆粒刺激巨噬細(xì)胞后,MIF水平在12小時開始顯著性升高,24小時達(dá)到高峰,36小時已經(jīng)開始下降。另外,0.1％鈦顆粒刺激小鼠巨噬細(xì)胞后,磷酸化的NF-κB在半小時開始升高,3小時達(dá)到高峰,6小時已經(jīng)

6、開始下降;與DNA結(jié)合的NF-κB蛋白量在1小時開始升高,3小時達(dá)到高峰,6小時已經(jīng)開始下降;使用PDTC后會使與DNA結(jié)合的NF-κB蛋白量顯著減少;IKB在半小時開始下降,3小時最低,6小時開始升高。
　　結(jié)論:
　　第一:界膜組織中MIF表達(dá)增多;表達(dá)MIF的巨噬細(xì)胞和成纖維細(xì)胞數(shù)量增多。
　　第二:鈦顆粒刺激小鼠空氣囊后,MIF表達(dá)增多,然后MIF上調(diào)炎癥反應(yīng)和MMP13表達(dá),促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)降解。
　　第