胰島素受體后信號(hào)通路與妊娠期糖尿病發(fā)病機(jī)制的研究.pdf

1、本研究分為三部分：
　　 第一部分：GLUT-4的表達(dá)及轉(zhuǎn)位與GDM胰島素抵抗的關(guān)系
　　 目的：研究GDM 患者骨骼肌組織中GLUT-4的表達(dá)及轉(zhuǎn)位變化，分析GLUT-4的表達(dá)及轉(zhuǎn)位變化與GDM 糖代謝異常和胰島素抵抗的關(guān)系。
　　 方法：選取GDM 患者26例(GDM組)及同期糖耐量正常的孕婦26例(對(duì)照組)，收集空腹血，并提取完整的腹直肌組織樣本。(1)采用放射免疫法及葡萄糖氧化酶法檢測(cè)各組空腹胰島素(FI

2、NS)及空腹葡萄糖(FPG)水平；應(yīng)用穩(wěn)態(tài)模型法計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)；(2)采用RT-PCR法和western blot法檢測(cè)骨骼肌組織中GLUT-4的表達(dá)和轉(zhuǎn)位的變化；(3)免疫組化法檢測(cè)GLUT-4 在肌肉組織中的分布。
　　 結(jié)果：(1)GDM組中FPG、FINS、HOMA-IR 水平均顯著高于對(duì)照組，各指標(biāo)分別比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；(2)GDM組和對(duì)照組之間骨骼肌中GLUT-4總量沒(méi)有

3、明顯差異(P>0.05)；(3)GDM組從骨骼肌細(xì)胞內(nèi)膜轉(zhuǎn)位到外膜的GLUT-4數(shù)量較對(duì)照組明顯減少(P<0.05)，相關(guān)分析顯示GLUT-4轉(zhuǎn)位的數(shù)量與FPG、FINS、HOMA-IR 指數(shù)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.42，-0.46，-0.51，P<0.05)。
　　 結(jié)論：GDM 患者骨骼肌組織中出現(xiàn)了GLUT-4的轉(zhuǎn)位異常，可能是導(dǎo)致GDM 葡萄糖的攝取障礙和胰島素抵抗的分子機(jī)制之一。
　　 第二部分：GDM骨骼肌組織中

4、PI3-K、PKB和GSK-3β表達(dá)和活性的變化
　　 目的：研究胰島素受體后信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中的關(guān)鍵分子PI3-Kp85、PKB、GSK-3β在GDM 患者骨骼肌組織中的表達(dá)和活性變化。
　　 方法：選取GDM 患者26例(GDM組)，同期糖耐量正常的孕婦26例(對(duì)照組)，提取完整的腹直肌活組織樣本。(1)采用免疫組化法檢測(cè)PI3Kp85、PKB、GSK-3β的表達(dá)；(2)應(yīng)用Western blot方法檢測(cè)GDM 骨骼肌

5、PKB、GSK-3β蛋白質(zhì)磷酸化情況；(3)ELISA法測(cè)定肌肉組織中PI3-K的活性。
　　 結(jié)果：(1)與對(duì)照組相比GDM組中的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子PKB、GSK-3β蛋白的表達(dá)未發(fā)現(xiàn)數(shù)量上的不同(P>0.05)；(2)GDM組中的PI3-Kp85的蛋白較對(duì)照組水平高(P<0.05)；(3)GDM組中的PKB、GSK-3β磷酸化水平及PI3-K的活性較對(duì)照組明顯降低，差異有顯著性(P<0.05)。
　　 結(jié)論：在GDM 骨骼

6、肌中胰島素受體后信號(hào)蛋白表達(dá)在GDM組和對(duì)照組中無(wú)顯著變化，但出現(xiàn)了PI3-K 及PKB、GSK-3β活性的下調(diào)，是導(dǎo)致GDM 胰島素抵抗和GLUT-4的轉(zhuǎn)位下降的受體后原因。
　　 第三部分：釩酸鈉調(diào)節(jié)IRS-1 酪氨酸磷酸化對(duì)GDM胰島素受體后信號(hào)通路的影響
　　 目的：研究酪氨酸磷酸化促進(jìn)劑釩酸鈉調(diào)節(jié)IRS-1 酪氨酸磷酸化對(duì)GDM骨骼肌中胰島素信號(hào)傳導(dǎo)通路中的PI-3K、PKB的活性及GLUT-4的轉(zhuǎn)位影響，探討

7、促進(jìn)IRS-1 酪氨酸磷酸化對(duì)GDM 胰島素受體后信號(hào)通路的影響。
　　 方法：選取GDM 患者26例(GDM組)，同期糖耐量正常的孕婦26例(對(duì)照組)，提取完整的骨骼肌組織樣本，用釩酸鈉孵育后，蔗糖梯度離心法分離細(xì)胞內(nèi)外膜提取總蛋白。(1)應(yīng)用免疫沉淀法檢測(cè)IRS-1的酪氨酸磷酸化水平；(2)ELISA法測(cè)定肌肉組織中PI3-K的活性；(3)Western blot方法檢測(cè)GDM 骨骼肌中GLUT-4轉(zhuǎn)位的變化。
　　

8、 結(jié)果：(1)釩酸鈉作用于GDM 骨骼肌組織后，IRS-1 酪氨酸磷酸化介導(dǎo)的PI3-k活性顯著升高，差異有顯著性(p<0.05)；(2)釩酸鈉作用后骨骼肌中的GLUT-4 跨膜易位也明顯增加；(3)但釩酸鈉作用后他們的水平仍低于對(duì)照組(p<0.05)。
　　 結(jié)論：改善GDM的IRS-1 酪氨酸磷酸化，能增加PI3-K活性和GLUT-4的轉(zhuǎn)位，部分改善GDM 胰島素信號(hào)傳導(dǎo)，促進(jìn)IRS-1 酪氨酸磷酸化可成為治療胰島素抵抗?jié)撛?/p>