惡性腫瘤基因工程納米疫苗抗腫瘤轉移與復發(fā)作用的研究.pdf

1、惡性腫瘤危害巨大，但惡性腫瘤的三大傳統(tǒng)療法－手術、放療和化療，治療效果不盡人意。隨著對腫瘤免疫理論的深入認識和一些新的實驗方法的涌現(xiàn)，腫瘤疫苗已成為預防和治療腫瘤轉移、復發(fā)的有力手段。但由于機體免疫網(wǎng)絡的復雜性、腫瘤異質性、疫苗生物利用度差等問題，使得現(xiàn)有腫瘤疫苗的免疫效果并不理想。黑色素瘤抗原（Melanoma Antigen，MAGE）是第一個被發(fā)現(xiàn)的人類腫瘤特異性抗原，MAGE3 是MAGE 家族的重要成員之一，在多種不同類型惡性

2、腫瘤中均有表達，在正常組織細胞（除睪丸、胎盤外）不表達；且MAGE3 可與人類白細胞抗原（Human Leukocytes Antigen，HLA）分子結合形成抗原復合物，此抗原復合物可被細胞毒性T 淋巴細胞（Cytotoxic T Lymphocyte，CTL）的T 細胞受體（T cell receptor，TCR）所識別，誘導特異性CTL 的殺傷作用，是腫瘤特異性免疫治療理想的靶分子。 熱休克蛋白（Heat Shock Pr

3、otein，HSP）具有分子伴侶作用，參與腫瘤抗原的加工遞呈，在誘導腫瘤免疫反應中發(fā)揮著重要作用；本室研究表明，HSP70與MAGE3 融合蛋白能提高MAGE3 蛋白疫苗的免疫效果。納米載藥系統(tǒng)與傳統(tǒng)載藥系統(tǒng)相比有很多優(yōu)點，可有效解決蛋白質藥物的生物利用度差的問題，目前已經(jīng)有許多深入而廣泛的研究。 本研究以納米脂質體包裹腫瘤特異性抗原MAGE3 與熱休克蛋白HSP70的融合蛋白（MH），制備出納米脂質體疫苗NL（MH），著重對其

4、抗腫瘤轉移與復發(fā)作用進行研究，為該納米疫苗臨床前研究奠定基礎。 一. 納米脂質體疫苗制備 目的：制備無明顯毒性、高效的惡性腫瘤基因工程納米疫苗。 方法：純化融合蛋白MH，薄膜分散－超聲法制備包裹MH 的納米脂質體腫瘤疫苗NL（MH），并評價其粒徑、包裹率及穩(wěn)定性；觀察NL（MH）免疫組小鼠的急性毒性反應，及重要臟器的病理學改變。 結果：①成功制備出粒徑為80±25nm 的納米脂質體，其藥物包裹率為30％，

5、于4℃放置6 個月后或3000rpm 10分鐘離心后無分層，證明其穩(wěn)定性良好；②與PBS 對照組相比，免疫組小鼠未見明顯毒性反應。 結論：該惡性腫瘤基因工程納米疫苗具有良好的理化性質，未見毒性反應。 二. 納米疫苗預防和治療腫瘤轉移和復發(fā)效應研究 目的：在小鼠體內(nèi)觀察納米疫苗預防和治療腫瘤肺轉移及預防腫瘤復發(fā)的作用。 方法：以PBS、空白脂質體、MH、MH /NL、NL（MH）免疫C57BL/6小鼠3 次

6、后，IFN-γ ELISPOT 和LDH 殺傷試實驗檢測納米疫苗激活小鼠特異性細胞免疫反應的情況；以實驗性肺轉移模型和自然肺轉移模型評價納米疫苗預防和治療腫瘤轉移作用；以腫瘤攻擊實驗和腫瘤切除后復發(fā)實驗來評價納米疫苗預防腫瘤復發(fā)作用。 結果：與其它組相比，NL（MH）組小鼠脾淋巴細胞中分泌IFN-γ的T 細胞數(shù)量明顯增多（P<0.05），CTL 對B16-MAGE3細胞具有顯著的特異性殺傷作用；在預防和治療腫瘤肺轉移實驗中，與其

7、它組小鼠相比，NL（MH）免疫組小鼠B16-MAGE3 腫瘤肺臟轉移結節(jié)數(shù)明顯減少（P<0.05）；在腫瘤攻擊實驗中，NL（MH）組B16-MAGE3 腫瘤成瘤時間長、成瘤率低；腫瘤切除后復發(fā)實驗中，NL（MH）組B16-MAGE3 腫瘤復發(fā)時間延遲，復發(fā)率明顯降低。 結論：NL（MH）能夠刺激機體產(chǎn)生強烈的MAGE3 特異性的細胞免疫反應，對表達MAGE3 的腫瘤細胞具有顯著的殺傷作用，能有效預防和治療B16-MAGE3 腫瘤