血管生成在胃腸道惡性腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移中的作用研究.pdf

1、目的：檢測胃腸道癌組織中血管生成素-2(Angiogenin-2,Ang-2)及其特異性酪氨酸激酶受體-2(tyrosine kinase with immunoglobulin-like and epidermal growth factor homology domains,Tie-2)及血管內(nèi)皮細胞生長因子受體-2(vascular endothelial growth factor receptor-2，VEGFR-2)的表達，

2、分析它們與腫瘤臨床病理特征、腫瘤微血管密度(Microvessel Density,MVD)及預后的關系，探討其是否可以作為預測胃腸道癌發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移和判斷預后的分子生物學標志物。
　　 方法：采用免疫組化(Immunohistochemistry,IHC)技術檢測2002年1月至2008年11月于寧夏醫(yī)科大學附屬醫(yī)院住院治療的118例胃腸道癌患者(胃癌64例，大腸癌54例)癌組織、40例癌旁正常組織(距癌組織≥5cm)及40例胃

3、腸良性疾病患者病變組織中Ang-2、Tie-2、VEGFR-2的表達；CD34標記微血管。采用蛋白免疫印跡(western blot)技術檢測2008年5月至2008年11月于寧夏醫(yī)科大學附屬醫(yī)院住院行手術治療的76例胃腸道癌患者(胃癌40例，大腸癌36例)癌組織、40例癌旁正常組織(距癌組織≥5cm)及40例胃腸良性疾病患者病變組織中Ang-2、Tie-2、VEGFR-2的表達。
　　 結(jié)果：
　　 (1)免疫組化實驗

4、部分：1)Ang-2、Tie-2和VEGFR-2在胃腸道癌組織中的陽性表達率分別為74.58[％]、69.49[％]和61.02[％]；在癌旁正常組織中的陽性表達率分別為25.00[％]、17.50[％]和17.50[％]；在胃腸良性病變組織中的陽性表達率分別為35.00[％]、32.50[％]和32.50[％]；三者在癌組織中的表達與癌旁正常組織及胃腸良性病變組織中的表達有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；癌旁正常組織和良性病變組織中的表達

5、無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。2)Ang-2表達與胃腸道癌浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移、臨床分期呈正相關(P<0.05)；Tie-2表達與胃腸道癌遠處轉(zhuǎn)移、臨床分期呈正相關(P<0.05)；VEGFR-2表達與胃腸道癌浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移、臨床分期呈正相關(P<0.05)；logistic多因素回歸分析顯示，遠處轉(zhuǎn)移和臨床分期均與Ang-2、Tie-2 及VEGFR-2的表達相關(P<0.05)；浸潤深度與Ang-2的表達相

6、關(P<0.05)。3)根治術后5年內(nèi)復發(fā)轉(zhuǎn)移者和未復發(fā)轉(zhuǎn)移者Ang-2、Tie-2和VEGFR-2的表達差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。4)Kaplan-Meier生存分析結(jié)果表明：Ang-2、Tie-2和VEGFR-2表達與總生存期相關，表達陰性者5年生存率明顯高于陽性表達者(P<0.05)。5)Ang-2、Tie-2和VEGFR-2表達與患者術后5年內(nèi)發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移相關(P<0.05)，并與患者總生存期相關，陰性表達者5年生存率

7、明顯高于陽性表達者(P<0.05)。6)兩個或三個因子共表達陽性率明顯高于單個因子陽性表達率，差異有統(tǒng)計學意義﹙P<0.05)，三者均陰性及單個因子表達陽性者5年生存率均較兩個或三個因子共表達者高﹙P<0.05)。7)Ang-2在胃腸道癌組織中的表達與CEA、CA199呈正相關(P<0.05)；Tie-2和VEGFR-2在胃腸道癌組織中的表達與CEA呈正相關(P<0.05)。在CEA陰性表達的胃腸癌患者中Ang-2、Tie-2、VEGF

8、R-2陽性表達率分別為59.09[％](13/22)、50.00[％](11/22)、40.91[％](9/22)；在CA199陰性表達的胃腸癌患者中Ang-2、Tie-2、VEGFR-2陽性表達率分別為64.29[％](18/28)、60.71[％](17/28)、50.00[％](14/28)。8)Ang-2、Tie-2、VEGFR-2在胃腸道癌組織中的陽性表達均與MVD呈正相關(P<0.05)。9)Ang-2、Tie-2和VEGF

9、R-2在胃腸道癌中的表達兩兩比較均呈正相關(P<0.05)。
　　 (2)Western blot實驗部分：1)Ang-2、Tie-2和VEGFR-2在胃腸道癌組織中的陽性表達率分別為76.32[％]、72.37[％]和63.16[％]；在癌旁正常組織中的陽性表達率分別為30.000[％]、22.50[％]和22.50[％]；在胃腸良性病變組織中的陽性表達率分別為40.00[％]、37.500[％]和32.50[％]，三者在癌組

10、織中的表達與癌旁正常組織及胃腸良性病變組織中的表達有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；癌旁正常組織和良性病變組織中的表達無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。2)Ang-2表達與胃腸道癌浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期呈正相關(P<0.05)；Tie-2表達與胃腸道癌臨床分期呈正相關(P<0.05)；VEGFR-2表達與胃腸道癌浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期呈正相關(P<0.05)；logistic多因素回歸分析顯示，浸潤深度和臨床分期與Ang-2的表

11、達相關(P<0.01)；臨床分期與Tie-2的表達相關(P<0.01)；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期與VEGFR-2的表達相關(P<0.05)。3)Ang-2、Tie-2和VEGFR-2在胃腸道癌中的表達呈正相關(P<0.05)。
　　 (3)免疫組化及Western blot檢測結(jié)果：兩種方法同時檢測了Ang-2、Tie-2和VEGFR-2在胃腸道癌組織中的表達，兩種檢測方法Kappa值分別為0.756、0.638、0.672；一致率

12、分別為91.83[％]、84.48[％]、86.89[％]。
　　 結(jié)論：
　　 (1)胃腸道癌組織中存在Ang-2、Tie-2和VEGFR-2蛋白的表達。
　　 (2)Ang-2表達與胃腸道癌浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移、臨床分期、MVD和根治術后5年內(nèi)復發(fā)轉(zhuǎn)移呈正相關，并與胃腸道癌的5年生存率相關，表明Ang-2與胃腸道癌的生物學行為密切相關，可以作為預測胃腸道癌發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移和判斷預后的分子生物學標志物之一

13、。
　　 (3)Tie-2表達與胃腸道癌遠處轉(zhuǎn)移、臨床分期、MVD和根治術后5年內(nèi)復發(fā)轉(zhuǎn)移呈正相關，并與胃腸道癌的5年生存率相關，表明Tie-2參與了胃腸道癌血管生成的調(diào)節(jié)，可以作為預測胃腸道癌發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移和判斷預后的分子生物學標志物之一。
　　 (4)VEGFR-2表達與胃腸道癌浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移、臨床分期、MVD和根治術后5年內(nèi)復發(fā)轉(zhuǎn)移呈正相關，并與胃腸道癌的5年生存率相關，表明VEGFR-2參與了胃腸道

14、癌血管生成的調(diào)節(jié)，可以作為預測胃腸道癌發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移和判斷預后的分子生物學標志物之一。
　　 (5)胃腸道癌組織中存在Ang-2、Tie-2和VEGFR-2三種蛋白的單獨表達和共表達，以共表達為主，并與患者的5年生存率相關，表明聯(lián)合檢測多種血管生成因子可能會提高侵襲轉(zhuǎn)移的檢出率，更能反應患者的預后。
　　 (6)Ang-2、Tie-2和VEGFR-2的表達與患者術后發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移相關，并與患者5年生存率相關，表明三者在胃腸道

15、癌發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移的早期階段即發(fā)揮了作用，可以作為預測胃腸道癌早期發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移的分子生物學標志物。
　　 (7)Ang-2表達與CEA、CA199呈正相關，Tie-2和VEGFR-2表達與CEA呈正相關，CEA、CA199表達陰性者均存在Ang-2、Tie-2和VEGFR-2陽性表達，說明對CEA、CA199陰性表達者檢測Ang-2、Tie-2、VEGFR-2可能會提高早期侵襲轉(zhuǎn)移的檢出率。
　　 (8)Ang-2、Tie-