人源乳酸桿菌對幽門螺桿菌性胃炎模型的治療研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、[目的] 篩選出具有一定耐酸耐膽鹽,且在體外抑制幽門螺桿菌(Helicobacterpylori,Hp)的人源乳酸桿菌,并對其進行生化和分子生物學分析。通過給BALB/c小鼠灌服.Hp,構建小鼠胃炎模型。研究篩選菌株對模型小鼠的治療效果,為微生態(tài)制劑的開發(fā)奠定理論和實驗基礎。 [方法] 第一部分 1、乳酸桿菌耐酸耐膽鹽能力的檢測,篩選出能夠耐受胃內環(huán)境的優(yōu)良的乳酸桿菌菌株。 2、篩選具有良好抑制或

2、殺滅幽門螺桿菌的乳酸桿菌: (1)采用打孔法篩選對幽門螺桿菌標準株SSl抑菌力強的乳酸桿菌菌株; (2)構建SSI粘附胃粘膜上皮細胞SGC 7901的細胞模型,利用間接熒光抗體試驗,建立乳酸桿菌對Hp粘附SGC 7901細胞的抑制試驗,并檢測乳酸菌活菌和滅活菌對SSl粘附能力的抑制作用。 3、應用API 50CHL乳酸菌系統(tǒng)生化鑒定卡和基于16SrRNA的分子生物學方法對所篩選的菌株進行分析。 第二部

3、分 1、小鼠灌服SSl活菌,構建小鼠Hp胃炎模型。 2、用乳酸桿菌干預模型小鼠,測定其治療效果: (1)胃粘膜組織中的Hp的培養(yǎng)鑒定; (2)間接ELISA法檢測血清Hp抗體; (3)胃組織切片染色鏡檢,評價炎癥情況; (4)檢測淋巴細胞轉化和NK細胞活性的情況,評價乳酸桿菌對模型小鼠免疫功能的影響; (5)利用熒光定量PCR檢測乳酸桿菌對Hp的根除效果。 [結果]

4、 第一部分 l、篩選出具有良好耐酸耐膽鹽的四株乳酸桿菌:Lac12、Lac15、Lac22、Lac31: 2、篩選出具有良好抑制幽門螺桿菌,并進行體內實驗的三株乳酸桿菌:Lac 15、Lac22、Lac31: 3、API 50CHL乳酸菌系統(tǒng)生化鑒定卡鑒定:Lac15為唾液乳桿菌,Lac22、Lac31、Lac12為植物乳桿菌。 4、16SrRNA分析:上述四株乳酸桿菌符合生化鑒定結果。 第二

5、部分 1、BALB/c小鼠Hp胃炎模型構建成功; 2、胃粘膜組織中未培養(yǎng)出Hp; 3、尿素酶實驗顯示,三株乳酸桿菌抑制或根除Hp的成功率為:Lac15為70%,Lac22為50%,Lac3l為50%; 4、Lac15能夠顯著性地降低血清中Hp的抗體水平(P<0.05),Lac22、Lac31也能夠降低血清中Hp的抗體水平,但是沒有顯示出統(tǒng)計學意義(P>0.05); 5、Lac15能夠很好的刺激淋巴

6、細胞轉化,與正常對照組相比有顯著性差異 (P<0.05)。三株菌對NK細胞活性均未表現(xiàn)出增強作用(P>0.05); 6、經(jīng)Lac15治療,胃粘膜組織的炎癥反應表現(xiàn)為輕度炎癥,經(jīng)Lac22、Lac31治療,則表現(xiàn)為中度炎癥; 7、熒光定量PCR檢測結果表明,Lac15、Lac22和Lac31對SSl有效的根除率分別為:20%、0、10%,低于用尿素酶測定的結果。 [結論] 1、篩選出l株唾液乳桿菌和3株植

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