人源乳酸桿菌對(duì)幽門螺桿菌性胃炎模型的治療研究.pdf

1、[目的］ 篩選出具有一定耐酸耐膽鹽，且在體外抑制幽門螺桿菌(Helicobacterpylori，Hp)的人源乳酸桿菌，并對(duì)其進(jìn)行生化和分子生物學(xué)分析。通過(guò)給BALB／c小鼠灌服．Hp，構(gòu)建小鼠胃炎模型。研究篩選菌株對(duì)模型小鼠的治療效果，為微生態(tài)制劑的開發(fā)奠定理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 [方法] 第一部分 1、乳酸桿菌耐酸耐膽鹽能力的檢測(cè)，篩選出能夠耐受胃內(nèi)環(huán)境的優(yōu)良的乳酸桿菌菌株。 2、篩選具有良好抑制或

2、殺滅幽門螺桿菌的乳酸桿菌： (1)采用打孔法篩選對(duì)幽門螺桿菌標(biāo)準(zhǔn)株SSl抑菌力強(qiáng)的乳酸桿菌菌株； (2)構(gòu)建SSI粘附胃粘膜上皮細(xì)胞SGC 7901的細(xì)胞模型，利用間接熒光抗體試驗(yàn)，建立乳酸桿菌對(duì)Hp粘附SGC 7901細(xì)胞的抑制試驗(yàn)，并檢測(cè)乳酸菌活菌和滅活菌對(duì)SSl粘附能力的抑制作用。 3、應(yīng)用API 50CHL乳酸菌系統(tǒng)生化鑒定卡和基于16SrRNA的分子生物學(xué)方法對(duì)所篩選的菌株進(jìn)行分析。 第二部

3、分 1、小鼠灌服SSl活菌，構(gòu)建小鼠Hp胃炎模型。 2、用乳酸桿菌干預(yù)模型小鼠，測(cè)定其治療效果： (1)胃粘膜組織中的Hp的培養(yǎng)鑒定； (2)間接ELISA法檢測(cè)血清Hp抗體； (3)胃組織切片染色鏡檢，評(píng)價(jià)炎癥情況； (4)檢測(cè)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化和NK細(xì)胞活性的情況，評(píng)價(jià)乳酸桿菌對(duì)模型小鼠免疫功能的影響； (5)利用熒光定量PCR檢測(cè)乳酸桿菌對(duì)Hp的根除效果。 [結(jié)果]

4、 第一部分 l、篩選出具有良好耐酸耐膽鹽的四株乳酸桿菌：Lac12、Lac15、Lac22、Lac31： 2、篩選出具有良好抑制幽門螺桿菌，并進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的三株乳酸桿菌：Lac 15、Lac22、Lac31： 3、API 50CHL乳酸菌系統(tǒng)生化鑒定卡鑒定：Lac15為唾液乳桿菌，Lac22、Lac31、Lac12為植物乳桿菌。 4、16SrRNA分析：上述四株乳酸桿菌符合生化鑒定結(jié)果。 第二

5、部分 1、BALB／c小鼠Hp胃炎模型構(gòu)建成功； 2、胃粘膜組織中未培養(yǎng)出Hp； 3、尿素酶實(shí)驗(yàn)顯示，三株乳酸桿菌抑制或根除Hp的成功率為：Lac15為70％，Lac22為50％，Lac3l為50％； 4、Lac15能夠顯著性地降低血清中Hp的抗體水平(P<0.05)，Lac22、Lac31也能夠降低血清中Hp的抗體水平，但是沒(méi)有顯示出統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)； 5、Lac15能夠很好的刺激淋巴

6、細(xì)胞轉(zhuǎn)化，與正常對(duì)照組相比有顯著性差異 (P<0.05)。三株菌對(duì)NK細(xì)胞活性均未表現(xiàn)出增強(qiáng)作用(P>0.05)； 6、經(jīng)Lac15治療，胃粘膜組織的炎癥反應(yīng)表現(xiàn)為輕度炎癥，經(jīng)Lac22、Lac31治療，則表現(xiàn)為中度炎癥； 7、熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果表明，Lac15、Lac22和Lac31對(duì)SSl有效的根除率分別為：20％、0、10％，低于用尿素酶測(cè)定的結(jié)果。 [結(jié)論] 1、篩選出l株唾液乳桿菌和3株植