抗幽門螺桿菌人胃源乳桿菌的篩選及其作用評價.pdf

1、目的:
　　從正常人胃粘膜中分離乳桿菌，篩選其中能耐胃腸液的酸性和膽鹽，并具有抗幽門螺桿菌作用的菌株，通過小鼠雙悉生模型，評價該菌株在胃內(nèi)抗幽門螺桿菌感染的作用，為進(jìn)一步研制防治幽門螺桿菌感染的益生菌提供實驗材料。
　　方法:
　　采集胃鏡檢查者的胃粘膜標(biāo)本，接種于MRS選擇性平板，37℃微需氧培養(yǎng)，挑取可疑菌落涂片鏡檢，對其中的革蘭陽性桿菌進(jìn)行分純培養(yǎng)，通過形態(tài)學(xué)和生化反應(yīng)初步鑒定。對疑為乳桿菌的細(xì)菌再PCR擴(kuò)增特異

2、性16SrDNA，并測序鑒定。
　　對分離的乳桿菌，評價其在模擬胃腸液pH2.5～pH4.5酸性條件和0.05％～0.2％膽鹽條件下的耐受性，通過瓊脂擴(kuò)散牛津杯法及細(xì)胞粘附試驗評價其抑制幽門螺桿菌生長和粘附人胃上皮細(xì)胞的能力，同時半定量檢測生物膜形成能力和產(chǎn)酸量的多少。
　　用幽門螺桿菌和篩選出的乳桿菌給無菌昆明小鼠灌胃，分別建立幽門螺桿菌和乳桿菌單悉生和雙悉生感染模型。并于末次灌胃后對胃內(nèi)定植的細(xì)菌進(jìn)行定量培養(yǎng)和定量PCR

3、檢測。同時檢測胃粘膜組織內(nèi)髓過氧化物酶的含量及切片HE染色觀察，評價其炎癥程度。
　　結(jié)果:
　　1.從21例胃鏡檢查者胃粘膜中分離出6株乳桿菌，編號為L1、L2、L3、L4-1、L4-2、L4-3。經(jīng)測序、NCBI序列比對確定L1、L2為口腔乳桿菌，L3為卷曲乳桿菌，L4-1為唾液乳桿菌，L4-2為加氏乳桿菌，L4-3為德氏保加利亞乳桿菌。
　　2.6株乳桿菌中的L3株，產(chǎn)酸量最大，形成生物膜的能力強于其它菌株，在p

4、H2.5、pH3.0時生長率均達(dá)到了150％，耐高濃度膽鹽，有較強的抗幽門螺桿菌活性，阻止幽門螺桿菌粘附人胃上皮細(xì)胞的作用最強。
　　3.乳桿菌和幽門螺桿菌在各實驗組中感染率均為100％，單悉生幽門螺桿菌感染組胃粘膜有明顯的腺體病變，大量上皮細(xì)胞脫落，髓過氧化物酶含量高，炎癥程度重。乳桿菌和幽門螺桿菌雙悉生組中幽門螺桿菌的定植量明顯降低（P＜0.05），炎癥變化不明顯，髓過氧化物酶含量低于單悉生幽門螺桿菌組(P＜0.05)。