MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通道在重癥急性胰腺炎發(fā)病機(jī)制中的作用.pdf

1、該課題分以下四個(gè)部分：第一部分重癥急性胰腺炎大鼠MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的動(dòng)態(tài)變化.目的：闡明SAP時(shí)大鼠胰腺及肺臟組織MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的變化規(guī)律.方法：以胰膽管逆行注射5％?；悄懰徕c建立SD大鼠的SAP模型，將SD大鼠56只隨機(jī)分為對(duì)照組（即造模前）、造模后0.5h、1h、3h、6h、12h、24h共7組，采用Western blot法檢測(cè)胰腺及肺臟組織p38MAPK、JNK活性的變化.結(jié)果：造模前能夠檢測(cè)到胰腺及肺臟組織p38MAP

2、K的基礎(chǔ)活性，分別為14.21±2.35、15.17±1.96，造模后胰腺組織的p38MAPK活性即迅速增高，至3小時(shí)達(dá)到高峰，為66.36±4.38，6小時(shí)及12小時(shí)仍維持較高的水平，分別為44.68±3.21和36.71±1.81，而肺臟組織的p38MAPK活性在造模后0.5小時(shí)無明顯變化，1小時(shí)點(diǎn)開始升高，6小時(shí)點(diǎn)達(dá)到高峰，為59.87±5.45，兩者在24小時(shí)點(diǎn)處的p38MAPK活性仍高于對(duì)照組，分別為26.45±2.37和29

3、.24±4.53，造模后各時(shí)間點(diǎn)與造模前比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，JNK的活性僅在造模后12小時(shí)點(diǎn)處有增高，其余時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)不到JNK的活性.結(jié)論：MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路其中特別是p38MAPK是SAP發(fā)病早期過程中的重要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，其長時(shí)間的持續(xù)活化對(duì)于SAP的病程發(fā)展具有重要意義.第二部分MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制劑CNI-1493對(duì)重癥急性胰腺炎大鼠干預(yù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.目的：研究CNI-1493對(duì)SAP大鼠的干預(yù)作用，為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依

4、據(jù).方法：84只SD大鼠隨機(jī)分為：（1）假手術(shù)對(duì)照（SO）組;（2）SAP+NS組;（3）SAP+CNI-1493組，其中SAP+CNI-1493組造模前1小時(shí)靜脈注射CNI-1493（10mg/Kg），SAP+NS組給予同劑量的生理鹽水.每組各取10只大鼠觀察24h內(nèi)存活率，其余每組18只大鼠，分為造模后3、6、12h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)，使用全自動(dòng)生化分析檢測(cè)血淀粉酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、血尿素氮（BUN），采用ELISA方法檢測(cè)血清TNF

5、-α、IL-1β，測(cè)定動(dòng)脈血氧分壓、肺臟溫/干重比以及肺泡灌洗液的白細(xì)胞計(jì)數(shù)、蛋白定量，并對(duì)胰腺、肺臟組織作常規(guī)的病理學(xué)檢查.第三部分CNI-1493對(duì)重癥急性胰腺炎大鼠枯否細(xì)胞分泌促炎細(xì)胞因子功能的影響.目的：探討CNI-1493對(duì)SAP大鼠枯否細(xì)胞（KCs）分泌促炎細(xì)胞因子TNF-α和IL-1β功能的影響.方法：30只SD大鼠隨機(jī)分為：（1）假手術(shù)對(duì)照（SO）組;（2）SAP+NS組;（3）SAP+CNI-1493組.SAP+CNI

6、-1493組造模前1小時(shí)靜脈注射CNI-1493（10mg/Kg），SAP+NS組給予同劑量的生理鹽水.假手術(shù)或造模后12h后處死動(dòng)物，利用密度梯度離心和選擇性粘附法分離出KCs，采用熒光實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)KCs內(nèi)TNF-α和IL-1βmRNA的表達(dá)，采用Western blot法檢測(cè)p38MAPK和JNK活化情況，并用ELISA法檢測(cè)血漿的TNF-α和IL-1β含量.結(jié)論：MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，其中可能主要是p38MAPK介導(dǎo)了S

7、AP大鼠的KCs促炎細(xì)胞因子TNF-α和IL-1β的分泌，抑制此信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可以減少SAP大鼠促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生，對(duì)于SAP尤其是SIRS防治可能具有重要意義.第四部分CNI-1493對(duì)重癥急性胰腺炎大鼠多形核粒細(xì)胞功能的影響.目的：探討CNI-1493對(duì)大鼠SAP時(shí)外周血多形核粒細(xì)胞功能影響.方法：54只SD大鼠隨機(jī)分為3組：（1）假手術(shù)對(duì)照（SO）組;（2）SAP+NS組;（3）SAP+CNI-1493組，SAP+CNI+1493組

8、造模前1小時(shí)靜脈注射CNI-1493（10mg/Kg），SAP+NS組給予同劑量的生理鹽水.每組分造模后3、6、12h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)取血，用密度梯度法分離多形核粒細(xì)胞（Polymorphonuclear,PMN），用流式細(xì)胞儀功能測(cè)定呼吸爆發(fā)功能，用紫外分光光度計(jì)測(cè)定PMN釋放髓過氧化物酶（MPO）以及胰腺、肺臟組織MPO含量的變化情況.結(jié)論：CNI-1493可以明顯抑制SAP時(shí)PMN的病理性功能亢進(jìn)及向組織的趨化浸潤，可能有益于SAP的治

9、療.三、總結(jié).該研究以SD大鼠胰膽管逆行注射5％牛磺膽酸鈉建立SAP模型，發(fā)現(xiàn)MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路其中特別是p38MAPK是SAP發(fā)病早期過程中的重要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，其長時(shí)間的持續(xù)活化對(duì)于SAP的病程發(fā)展具有重要意義.在SAP大鼠模型上預(yù)先給予MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制劑CNI-1493，能夠減輕炎癥反應(yīng)，減輕SAP并發(fā)的肺損傷，還能夠抑制KCs分泌促炎細(xì)胞因子TNF-α和IL-1β，并且抑制多形核粒細(xì)胞的病理性功能亢進(jìn)及向組織趨化浸潤，提