胰腺腺泡細胞M3型膽堿能受體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在急性胰腺炎發(fā)病機制中的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該實驗中,我們通過四部分實驗進一步探討另一調(diào)節(jié)胰腺腺泡細胞胰酶分泌的M3膽堿能受體信號傳導(dǎo)通路與急性胰腺炎發(fā)病的關(guān)系.在第一部分中,為確定M3型膽堿能受體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是否參與調(diào)節(jié)胰腺腺泡細胞內(nèi)NF-κ B的活化,我們通過體外分離培養(yǎng)鼠胰腺腺泡細胞,M3型膽堿能受體激動劑卡巴膽堿、M3型膽堿能受體拮抗劑阿托品和NF-κ B的抑制物PDTC體外刺激鼠胰腺腺泡細胞,EMSA的法檢測NF-κ B活化.在第二部分中,我們用RT-PCR法檢測趨化因

2、子MOB-1,MCP-1mRNA的表達,研究M3型膽堿能受體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是否參與調(diào)節(jié)胰腺腺泡細胞趨化因子的表達,以及調(diào)節(jié)機制.在第三部分中,為確定高濃度的M3型膽堿能受體激動劑卡巴膽堿誘導(dǎo)產(chǎn)生的胰腺腺泡細胞內(nèi)胰蛋白酶原激活和NF-κ B活化與胰腺腺泡細胞損傷的關(guān)系,我們分別用卡巴膽堿、胰蛋白酶原活化抑制物pefabloc和NF-κ B的抑制物PDTC,體外作用鼠胰腺腺泡細胞;通過檢測熒光底物法檢測細胞內(nèi)胰蛋白酶活性,用細胞乳酸脫氫酶(L

3、DH)排除率評估細胞損傷.結(jié)果顯示:高濃度的M3型膽堿能受體激動劑(10-3M卡巴膽堿)能誘導(dǎo)鼠胰腺腺泡細胞內(nèi)胰蛋白酶活性和細胞乳酸脫氫酶(LDH)排除率顯著性增加;胰蛋白酶原活化抑制物pefabloc能顯著性的降低10-3M卡巴膽堿誘導(dǎo)的鼠胰腺腺泡細胞內(nèi)胰蛋白酶活性和細胞乳酸脫氫酶(LDH)排除率;而NF-κ B的抑制物PDTC對10-3M卡巴膽堿誘導(dǎo)的鼠胰腺腺泡細胞內(nèi)胰蛋白酶活性和細胞乳酸脫氫酶(LDH)排除率無明顯抑制作用,在第四

4、部分中,我們進一步確定了高濃度的卡巴膽堿誘導(dǎo)鼠胰腺腺泡細胞內(nèi)胰蛋白酶原激活和NF-κ B活化的關(guān)系,研究發(fā)現(xiàn):通過胰蛋白酶原活化抑制物pefabloc抑制胰腺腺泡細胞內(nèi)胰蛋白酶原激活,導(dǎo)致高濃度的卡巴膽堿誘導(dǎo)NF-κ B活化抑制;而NF-κ B的抑制物PDTC能抑制高濃度的卡巴膽堿誘導(dǎo)的鼠胰腺腺泡細胞NF-κ B活化,但對胰蛋白酶原的活化無明顯抑制作用.綜上實驗,我們得出以下結(jié)論:M3膽堿能受體信號傳導(dǎo)通路的過分激活,通過激活鼠胰腺腺泡

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