胰腺腺泡細(xì)胞M3型膽堿能受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在急性胰腺炎發(fā)病機(jī)制中的研究.pdf

1、該實(shí)驗(yàn)中,我們通過(guò)四部分實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探討另一調(diào)節(jié)胰腺腺泡細(xì)胞胰酶分泌的M3膽堿能受體信號(hào)傳導(dǎo)通路與急性胰腺炎發(fā)病的關(guān)系.在第一部分中,為確定M3型膽堿能受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是否參與調(diào)節(jié)胰腺腺泡細(xì)胞內(nèi)NF-κ B的活化,我們通過(guò)體外分離培養(yǎng)鼠胰腺腺泡細(xì)胞,M3型膽堿能受體激動(dòng)劑卡巴膽堿、M3型膽堿能受體拮抗劑阿托品和NF-κ B的抑制物PDTC體外刺激鼠胰腺腺泡細(xì)胞,EMSA的法檢測(cè)NF-κ B活化.在第二部分中,我們用RT-PCR法檢測(cè)趨化因

2、子MOB-1,MCP-1mRNA的表達(dá),研究M3型膽堿能受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是否參與調(diào)節(jié)胰腺腺泡細(xì)胞趨化因子的表達(dá),以及調(diào)節(jié)機(jī)制.在第三部分中,為確定高濃度的M3型膽堿能受體激動(dòng)劑卡巴膽堿誘導(dǎo)產(chǎn)生的胰腺腺泡細(xì)胞內(nèi)胰蛋白酶原激活和NF-κ B活化與胰腺腺泡細(xì)胞損傷的關(guān)系,我們分別用卡巴膽堿、胰蛋白酶原活化抑制物pefabloc和NF-κ B的抑制物PDTC,體外作用鼠胰腺腺泡細(xì)胞;通過(guò)檢測(cè)熒光底物法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)胰蛋白酶活性,用細(xì)胞乳酸脫氫酶(L

3、DH)排除率評(píng)估細(xì)胞損傷.結(jié)果顯示:高濃度的M3型膽堿能受體激動(dòng)劑(10-3M卡巴膽堿)能誘導(dǎo)鼠胰腺腺泡細(xì)胞內(nèi)胰蛋白酶活性和細(xì)胞乳酸脫氫酶(LDH)排除率顯著性增加;胰蛋白酶原活化抑制物pefabloc能顯著性的降低10-3M卡巴膽堿誘導(dǎo)的鼠胰腺腺泡細(xì)胞內(nèi)胰蛋白酶活性和細(xì)胞乳酸脫氫酶(LDH)排除率;而NF-κ B的抑制物PDTC對(duì)10-3M卡巴膽堿誘導(dǎo)的鼠胰腺腺泡細(xì)胞內(nèi)胰蛋白酶活性和細(xì)胞乳酸脫氫酶(LDH)排除率無(wú)明顯抑制作用,在第四

4、部分中,我們進(jìn)一步確定了高濃度的卡巴膽堿誘導(dǎo)鼠胰腺腺泡細(xì)胞內(nèi)胰蛋白酶原激活和NF-κ B活化的關(guān)系,研究發(fā)現(xiàn):通過(guò)胰蛋白酶原活化抑制物pefabloc抑制胰腺腺泡細(xì)胞內(nèi)胰蛋白酶原激活,導(dǎo)致高濃度的卡巴膽堿誘導(dǎo)NF-κ B活化抑制;而NF-κ B的抑制物PDTC能抑制高濃度的卡巴膽堿誘導(dǎo)的鼠胰腺腺泡細(xì)胞NF-κ B活化,但對(duì)胰蛋白酶原的活化無(wú)明顯抑制作用.綜上實(shí)驗(yàn),我們得出以下結(jié)論:M3膽堿能受體信號(hào)傳導(dǎo)通路的過(guò)分激活,通過(guò)激活鼠胰腺腺泡