外源性肺泡表面活性物質(zhì)對兔子鹽酸吸入性肺損傷的治療作用.pdf

1、胃液誤吸是臨床危、急癥病人中較為常見的并發(fā)癥，同時又是ARDS的重要病因之一，而ALI被認(rèn)為是ARDS的早期階段，因此研究ALI模型對ARDS的治療具有很重要的意義。胃液吸入所導(dǎo)致的ALI/ARDS包括兩個時相。第一時相：胃酸對肺泡-毛細(xì)血管膜的直接損傷；第二時相：第一時相之后所引起的繼發(fā)性肺損傷（大約發(fā)生在誤吸后4小時）。近年來大量的動物實驗及臨床研究均表明在胃液誤吸后的第一時相立即給予PS，具有改善ARDS肺換氣功能和力學(xué)特性等作用

2、，預(yù)后較好。而本研究擬通過建立鹽酸吸入性ALI模型，在鹽酸吸入后4小時（繼發(fā)性肺損傷階段），給予自制PS干預(yù)，探討外源性PS對臨床上這一類發(fā)現(xiàn)相對較晚ALI/ARDS病人的救治意義。
　　目的
　　本試驗以兔子為研究對象，通過建立鹽酸吸入性肺損傷模型。在鹽酸吸入后引起的繼發(fā)性肺損傷階段，外源性給予PS干預(yù)，之后共觀察6h，并動態(tài)監(jiān)測各預(yù)設(shè)時間點PaO2、PaCO2，以及處死后左下肺組織濕/干（W/D）,支氣管肺泡灌洗液(BA

3、LF)中總蛋白(TP)含量、WBC總數(shù)和左上肺組織病理學(xué)改變。
　　材料與方法
　　1.動物分組：健康雄性新西蘭大白兔18只，體重1.7～2.3kg，隨機(jī)分3組，每組6只，即健康對照組，模型組，治療組。
　　2.建立模型：速眠新針（0.2ml/kg）肌肉注射麻醉后，將兔子仰臥固定于操作臺上，頸正中切口，分離頸總動脈、氣管。將一10ml注射器針頭經(jīng)暴露的氣管處插入兔子氣管內(nèi)并固定，用于吸入稀HCL造模和PS給藥。右側(cè)頸總

4、動脈插入靜脈留置針，便于采血，穩(wěn)定15min后開始制造模型。先右側(cè)體位，頭部抬高45°角，右側(cè)支氣管內(nèi)緩慢滴入pH=1.5的鹽酸2ml/kg（總量的0.6倍），然后緩慢推入2毫升的空氣，停留5分鐘后，同上述方法向左肺內(nèi)注入鹽酸總量的0.4倍，并推注2毫升的空氣，使其均勻彌散。實驗動物氧合指數(shù)﹤300mmHg的動物為酸吸入性肺損傷兔子。
　　3.方法：治療組：在鹽酸注入后4小時經(jīng)氣管導(dǎo)管給予PS120mg/kg（濃度為80mg/ml

5、）進(jìn)行干預(yù)；對照組及模型組：在相應(yīng)時間經(jīng)氣管導(dǎo)管給予同等體積的生理鹽水。各組分別在注入HCL前0.5h、注入HCL后4h及治療后0.5h、2h、4h、6h經(jīng)頸總動脈采集1ml血測血氣。之后處死動物，距氣管叉0.3cm處切斷。分離氣管并經(jīng)切口插入氣管插管且固定，迅速開胸。結(jié)扎左肺，右肺采用4℃無菌生理鹽水共60ml分3次進(jìn)行灌洗，每次灌洗時均將生理鹽水緩慢注入，反復(fù)抽吸3次后緩慢抽出。回收的BALF經(jīng)紗布過濾后，于4℃以1000r/min

6、離心10min，上清液置于-80℃超低溫冰箱凍存，供以后測定其中TP含量；細(xì)胞沉淀懸浮于1ml生理鹽水中，取部分懸液經(jīng)甲紫染色后常規(guī)計數(shù)WBC總數(shù)；然后取左肺下葉，冷生理鹽水沖凈，無菌紗布拭干，即刻稱濕重，然后于烘箱（80℃，48h）烘干至恒重，稱干重，計算肺組織W/D，表示肺組織含水量。取左肺上葉經(jīng)10％的福爾馬林溶液固定、包埋、切片行HE染色后行常規(guī)病理學(xué)檢查。
　　結(jié)果
　　1.各組PaO2及PaCO2的變化
　

7、　造模前，三組動物的PaO2及PaCO2值差異無顯著性(P>0.05)。模型組、治療組在HCL吸入后PaO2逐步降低，PaCO2逐步升高，與對照組比較差異顯著(P<0.01)。與模型組相比，治療組經(jīng)PS治療后，各時間點的PaO2及PaCO2顯著改善(P<0.01)，但仍然無法恢復(fù)到健康對照組的水平(P<0.01)。
　　2.肺滲透性檢測
　　治療組BALF中TP、WBC總數(shù)及左肺下葉W/D，顯著低于模型組(P<0.01)，但

8、仍然無法恢復(fù)到健康對照組的水平(P<0.01)。
　　3.肺組織肉眼觀
　　對照組為正常肺組織。模型組見肺組織水腫，表面可見暗紅色點、片狀出血區(qū)，以雙下肺背側(cè)為主，切面可見血性滲液。治療組見肺組織表面呈粉紅色，均勻一致，未見明顯水腫，部分切面有少量滲液。
　　4.光鏡下觀察
　　對照組的肺組織結(jié)構(gòu)基本正常。模型組的肺組織切片經(jīng)HE染色后可見：不同程度的肺泡和肺間質(zhì)水腫，肺泡間隔及小葉間隔斷裂、破壞，并有散在出血。