補(bǔ)腎方劑對(duì)糖尿病大鼠牙周炎牙周組織形態(tài)結(jié)構(gòu)及一氧化氮分布的影響.pdf

1、目的：建立大鼠糖尿病牙周炎模型，觀察補(bǔ)腎方劑對(duì)糖尿病大鼠牙周炎牙周組織形態(tài)結(jié)構(gòu)及一氧化氮的影響，探討補(bǔ)腎方劑減少NO生成、阻止牙周病變機(jī)制，為臨床應(yīng)用中藥補(bǔ)腎方劑防治糖尿病牙周炎提供理論依據(jù)。 方法：選用健康雄性SD大鼠116只，3-4月齡，隨機(jī)取82只大鼠腹腔注射STZ溶液(55mg/kg體重)，制備糖尿病模型。注射STZ溶液3天后，尾尖采血測(cè)定空腹血糖，用代謝籠收集12小時(shí)尿測(cè)定尿糖，確定糖尿病出現(xiàn)后一周，隨機(jī)取61只糖尿病

2、大鼠和17只正常大鼠，用直徑為0.2mm的正畸鋼絲結(jié)扎大鼠雙側(cè)上頜第一磨牙頸部。4周后進(jìn)行牙周炎成模檢測(cè)。16只未作任何處理的大鼠為正常組，16只單純結(jié)扎的大鼠為牙周炎組，20只未做結(jié)扎的糖尿病大鼠為糖尿病組，60只糖尿病牙周炎大鼠隨機(jī)分為糖尿病牙周炎組、糖尿病牙周炎AG治療組和糖尿病牙周炎中藥治療組，各20只。共分為6組。結(jié)扎術(shù)后4周隨機(jī)抽取動(dòng)物做右上頜第一磨牙牙體牙周聯(lián)合切片，光鏡觀察確定牙周炎形成。建立糖尿病牙周炎模型后第一天起，

3、糖尿病牙周炎中藥治療組給以中藥補(bǔ)腎方劑(90g水煎，濃縮至90ml，1.5ml2/日灌胃)，糖尿病牙周炎AG治療組用稀釋成3‰的氨基胍溶液灌養(yǎng)。其余各組自由飲水。于給藥后4周、6周時(shí)處死動(dòng)物并取上頜骨，左側(cè)上頜骨取第一磨牙周?chē)凝l組織，測(cè)定NO的含量，右側(cè)上頜骨置于4％多聚甲醛溶液中固定。7％乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)中脫鈣2月，制作HE染色組織學(xué)切片，做光鏡及組織學(xué)計(jì)量觀察；免疫組織化學(xué)染色，觀察一氧化氮合酶(iNOS)在齦組織中的

4、表達(dá)。 結(jié)果：1腹腔注射STZ后第3天，大鼠空腹血糖顯著升高，尿糖陽(yáng)性，說(shuō)明腹腔注射STZ已成功建立糖尿病動(dòng)物模型。2牙周結(jié)扎術(shù)后4周組織學(xué)觀察：結(jié)扎動(dòng)物結(jié)合上皮向根方增殖形成牙周袋，牙齦上皮和固有層內(nèi)有輕度炎細(xì)胞浸潤(rùn)；牙周纖維排列紊亂；牙槽嵴頂破壞吸收。3用藥期間組織學(xué)觀察：正常組：整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程結(jié)合上皮位置正常，牙周韌帶纖維排列有序、整齊；牙槽嵴頂無(wú)吸收。糖尿病組：4周時(shí)牙齦上皮和固有層內(nèi)有輕度炎細(xì)胞浸潤(rùn)；牙周膜毛細(xì)血管數(shù)目增

5、多、充血；牙槽嵴頂無(wú)吸收。6周時(shí)固有層內(nèi)可見(jiàn)中度炎細(xì)胞浸潤(rùn)；牙周纖維排列紊亂，牙槽嵴頂無(wú)吸收。牙周炎組：4周時(shí)結(jié)合上皮與牙體分離加深牙周袋，固有層中度炎細(xì)胞浸潤(rùn)；牙周膜纖維排列紊亂，牙槽嵴高度降低。6周時(shí)有較深牙周袋形成；牙槽嵴高度降低，可見(jiàn)活躍的破骨細(xì)胞。糖尿病牙周炎組：4周時(shí)，固有層中度炎細(xì)胞浸潤(rùn)；牙周膜纖維排列紊亂，牙槽嵴頂高度降低，可見(jiàn)大量的破骨細(xì)胞。6周時(shí)牙齦上皮糜爛，固有層內(nèi)有重度炎細(xì)胞浸潤(rùn)，形成深牙周袋，牙周膜纖維斷裂，牙

6、槽嵴頂可見(jiàn)大量的破骨細(xì)胞，牙槽骨高度降低；牙骨質(zhì)破壞吸收。糖尿病牙周炎AG治療組：4周時(shí)固有層內(nèi)有輕度炎細(xì)胞浸潤(rùn)；牙周膜纖維排列紊亂；牙槽嵴頂有新骨形成。6周時(shí)牙槽嵴頂成骨細(xì)胞較多，有新骨生成，牙槽嵴高度增加。糖尿病牙周炎中藥治療組：4周時(shí)，固有層內(nèi)有輕度炎細(xì)胞浸潤(rùn)；牙周膜纖維新生；牙槽嵴頂有新骨形成。6牙槽嵴頂有新骨形成，牙槽骨高度增加，有新牙骨質(zhì)形成。4用藥期間組織學(xué)計(jì)量學(xué)觀察：結(jié)締組織附著水平喪失量：4周時(shí)結(jié)締組織附著水平喪失量由

7、高到低依次為：糖尿病牙周炎組、牙周炎組、糖尿病牙周炎AG治療組、糖尿病牙周炎中藥治療組、糖尿病組與正常組，其中，正常組與糖尿病組比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，糖尿病牙周炎AG治療組與糖尿病牙周炎中藥治療組比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，其余各組之間比較均有顯著性差異(P＜0.05)。6周時(shí)結(jié)締組織附著水平喪失量由高到低依次為：糖尿病牙周炎組、牙周炎組、糖尿病牙周炎AG治療組、糖尿病牙周炎中藥治療組、糖尿病組與正常組，其中，正常組與

8、糖尿病組比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，其余各組之間比較均有顯著性差異(P＜0.05)。牙槽骨高度喪失量：4周時(shí)牙槽骨高度喪失量由高到低依次為：糖尿病牙周炎組、牙周炎組、糖尿病牙周炎AG治療組、糖尿病牙周炎中藥治療組、糖尿病組與正常組，其中，正常組與糖尿病組比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，糖尿病牙周炎AG治療組與糖尿病牙周炎中藥治療組比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，其余各組之間比較均有顯著性差異(P＜0.05)。6周時(shí)牙槽骨高度喪

9、失量由高到低依次為：糖尿病牙周炎組、牙周炎組、糖尿病牙周炎AG治療組、糖尿病牙周炎中藥治療組、糖尿病組與正常組，其中，正常組與糖尿病組比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，其余各組之間比較均有顯著性差異(P＜0.05)。5各組大鼠齦組織中NO含量的動(dòng)態(tài)變化(給藥后4、6周)給藥后4周時(shí)，各組大鼠齦組織中NO含量由高到底依次為糖尿病牙周炎組、糖尿病組、牙周炎組、正常組、糖尿病牙周炎中藥治療組及糖尿病牙周炎AG治療組。其中糖尿病牙周炎組與糖尿病

10、組比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，正常組與糖尿病牙周炎中藥治療組比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，其它各組比較均有顯著性差異(P＜0.05)。給藥后6周時(shí)同給藥后4周。6iNOS在各組大鼠牙齦組織中的表達(dá)正常組：弱陽(yáng)性表達(dá)。牙周炎組：陽(yáng)性表達(dá)。糖尿病組：陽(yáng)性或強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。糖尿病牙周炎組：強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。糖尿病牙周炎AG治療組：弱陽(yáng)性表達(dá)。糖尿病牙周炎中藥治療組：呈弱陽(yáng)性表達(dá)。 結(jié)論：1補(bǔ)腎方劑促進(jìn)糖尿病牙周炎牙周組織的修復(fù)，降低N

11、O的含量。隨著NO含量降低，牙周組織更趨向修復(fù)。2糖尿病牙周炎中藥治療組齦組織中NO含量與正常齦組織中NO含量無(wú)差異，提示補(bǔ)腎方劑對(duì)NO的調(diào)節(jié)作用更接近生理狀態(tài)。3AG也能促進(jìn)牙周組織的修復(fù)，降低NO含量，但對(duì)牙周組織的修復(fù)不及補(bǔ)腎方劑。4AG降低NO的作用比補(bǔ)腎方劑更明顯，用藥6周后，糖尿病牙周炎中藥治療組的牙周組織的修復(fù)優(yōu)于糖尿病牙周炎AG治療組，提示：NO適量時(shí)，促進(jìn)牙周組織的修復(fù)，NO含量低于或高于正常時(shí)對(duì)牙周組織的修復(fù)都是不利