微波消融聯(lián)合樹(shù)突狀細(xì)胞瘤內(nèi)注射對(duì)荷瘤小鼠T淋巴細(xì)胞亞群影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的: 1.探討微波消融對(duì)荷瘤小鼠T淋巴細(xì)胞亞群的影響； 2.觀測(cè)不同功能階段的樹(shù)突狀細(xì)胞瘤內(nèi)注射聯(lián)合微波消融治療后荷瘤小鼠免疫功能變化的時(shí)間曲線，為DC二次瘤內(nèi)注射尋找合適的時(shí)間窗，為臨床抗腫瘤治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法: 1.無(wú)菌條件下取出4只健康BALB/C小鼠長(zhǎng)骨骨髓，在兩培養(yǎng)板中誘導(dǎo)培養(yǎng)成不同功能階段的樹(shù)突狀細(xì)胞，光鏡觀察DCs形態(tài)變化，流式細(xì)胞儀鑒定DCs細(xì)胞膜表面標(biāo)志物，并測(cè)定其MLR能力，留

2、取DC待用。 2.BALB/C小鼠96只，雌雄各半，隨機(jī)分為四組，每組24只，1-4組分別為對(duì)照組、單純MA組、MA聯(lián)合iDCs瘤內(nèi)注射組及MA聯(lián)合成熟DCs瘤內(nèi)注射組。 3.小鼠背部皮下注射骨髓瘤細(xì)胞懸液，腫瘤直徑約10mm時(shí)，對(duì)2-4組小鼠腫瘤行MA治療，MA治療后6小時(shí)分別對(duì)3、4組小鼠瘤體內(nèi)多點(diǎn)注射體外培養(yǎng)的iDCs及成熟DCs。 4.分別于MA治療后1、3、5、7、9及11天流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組小鼠外周T

3、淋巴細(xì)胞亞群(CD3、CD4、CD8)，并計(jì)算CD4+/CD8+值。 5.采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件，以重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)方差分析的方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)；α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。 結(jié)果: 1.DCs培養(yǎng)結(jié)果：骨髓來(lái)源的單核細(xì)胞經(jīng)過(guò)小鼠重組GM-CSF和IL-4誘導(dǎo)分化，第3天可見(jiàn)小丘樣突起，以后突起逐漸增多，第7～9天時(shí)，形態(tài)較大且刺突顯著，呈花簇狀生長(zhǎng)；第10天流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示：A培養(yǎng)板中DCs細(xì)胞表達(dá)CD11c、

4、CD83、CD86分別為70.25％、32.29％、33.33％，為未成熟DC表型；加入終濃度為1μg/ml LPS的B培養(yǎng)板中DCs細(xì)胞表達(dá)CD11c、CD83、CD86分別為72.81％、54.24％、73.48％，CD83、CD86的表達(dá)顯著高于A組DCs(P<0.05)，提示B培養(yǎng)板中細(xì)胞為成熟DCs。A、B培養(yǎng)板中DCs均能體外激發(fā)MLR(P<0.05)，并隨DCs濃度增加而呈現(xiàn)增長(zhǎng)趨勢(shì)(P<0.05)，其中成熟Ocs刺激增殖

5、的強(qiáng)度顯著大于iDCs組(P<0.05)。 2.小鼠外周血T淋巴細(xì)胞亞群流式細(xì)胞儀檢測(cè)：荷瘤對(duì)照組小鼠的CD3+、CD4+及CD4+/CD8+隨著生存時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸下降(P<0.05)；MA組小鼠的CD3+、CD4+及CD4+/CD8+隨生存時(shí)間的延長(zhǎng)無(wú)明顯改變，均值高于荷瘤對(duì)照組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；在術(shù)后3、5、7天，MA聯(lián)合iDCs組小鼠的CD4+及CD4+/CD8+較單純MA組及MA聯(lián)合成熟DCs組減低(P

6、<0.05)；而MA.聯(lián)合成熟DCs組小鼠CD3+、CD4+及CD4+/CD8+則在術(shù)后第3、5、7天較單純MA組高(P<0.05)。 結(jié)論: 1.MA能改善荷瘤小鼠的免疫抑制狀態(tài)。 2.MA聯(lián)合成熟DCs能進(jìn)一步增強(qiáng)荷瘤小鼠的抗腫瘤免疫反應(yīng) 3.MA聯(lián)合未成熟的DCs可能誘導(dǎo)荷瘤小鼠的免疫耐受。 4.MA聯(lián)合成熟DCs瘤內(nèi)注射增強(qiáng)荷瘤小鼠免疫功能的時(shí)間約1周，為二次瘤內(nèi)注射成熟DCs提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)