微波消融聯(lián)合樹突狀細胞瘤內注射對荷瘤小鼠T淋巴細胞亞群影響的實驗研究.pdf

1、目的: 1.探討微波消融對荷瘤小鼠T淋巴細胞亞群的影響； 2.觀測不同功能階段的樹突狀細胞瘤內注射聯(lián)合微波消融治療后荷瘤小鼠免疫功能變化的時間曲線，為DC二次瘤內注射尋找合適的時間窗，為臨床抗腫瘤治療提供實驗依據(jù)。 方法: 1.無菌條件下取出4只健康BALB/C小鼠長骨骨髓，在兩培養(yǎng)板中誘導培養(yǎng)成不同功能階段的樹突狀細胞，光鏡觀察DCs形態(tài)變化，流式細胞儀鑒定DCs細胞膜表面標志物，并測定其MLR能力，留

2、取DC待用。 2.BALB/C小鼠96只，雌雄各半，隨機分為四組，每組24只，1-4組分別為對照組、單純MA組、MA聯(lián)合iDCs瘤內注射組及MA聯(lián)合成熟DCs瘤內注射組。 3.小鼠背部皮下注射骨髓瘤細胞懸液，腫瘤直徑約10mm時，對2-4組小鼠腫瘤行MA治療，MA治療后6小時分別對3、4組小鼠瘤體內多點注射體外培養(yǎng)的iDCs及成熟DCs。 4.分別于MA治療后1、3、5、7、9及11天流式細胞儀檢測各組小鼠外周T

3、淋巴細胞亞群(CD3、CD4、CD8)，并計算CD4+/CD8+值。 5.采用SPSS11.0統(tǒng)計軟件，以重復測量數(shù)據(jù)方差分析的方法進行統(tǒng)計學檢驗；α=0.05為檢驗水準。 結果: 1.DCs培養(yǎng)結果：骨髓來源的單核細胞經(jīng)過小鼠重組GM-CSF和IL-4誘導分化，第3天可見小丘樣突起，以后突起逐漸增多，第7～9天時，形態(tài)較大且刺突顯著，呈花簇狀生長；第10天流式細胞儀檢測顯示：A培養(yǎng)板中DCs細胞表達CD11c、

4、CD83、CD86分別為70.25％、32.29％、33.33％，為未成熟DC表型；加入終濃度為1μg/ml LPS的B培養(yǎng)板中DCs細胞表達CD11c、CD83、CD86分別為72.81％、54.24％、73.48％，CD83、CD86的表達顯著高于A組DCs(P<0.05)，提示B培養(yǎng)板中細胞為成熟DCs。A、B培養(yǎng)板中DCs均能體外激發(fā)MLR(P<0.05)，并隨DCs濃度增加而呈現(xiàn)增長趨勢(P<0.05)，其中成熟Ocs刺激增殖

5、的強度顯著大于iDCs組(P<0.05)。 2.小鼠外周血T淋巴細胞亞群流式細胞儀檢測：荷瘤對照組小鼠的CD3+、CD4+及CD4+/CD8+隨著生存時間的延長而逐漸下降(P<0.05)；MA組小鼠的CD3+、CD4+及CD4+/CD8+隨生存時間的延長無明顯改變，均值高于荷瘤對照組，但無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；在術后3、5、7天，MA聯(lián)合iDCs組小鼠的CD4+及CD4+/CD8+較單純MA組及MA聯(lián)合成熟DCs組減低(P

6、<0.05)；而MA.聯(lián)合成熟DCs組小鼠CD3+、CD4+及CD4+/CD8+則在術后第3、5、7天較單純MA組高(P<0.05)。 結論: 1.MA能改善荷瘤小鼠的免疫抑制狀態(tài)。 2.MA聯(lián)合成熟DCs能進一步增強荷瘤小鼠的抗腫瘤免疫反應 3.MA聯(lián)合未成熟的DCs可能誘導荷瘤小鼠的免疫耐受。 4.MA聯(lián)合成熟DCs瘤內注射增強荷瘤小鼠免疫功能的時間約1周，為二次瘤內注射成熟DCs提供實驗基礎