p27與Skp2蛋白在牙齦癌中的表達(dá)及其意義.pdf

1、目的：正常細(xì)胞在致癌因素的刺激下經(jīng)過一系列的轉(zhuǎn)化過程，包括癌基因和抑癌基因改變的積累最終轉(zhuǎn)化成腫瘤細(xì)胞?，F(xiàn)已證明腫瘤細(xì)胞的增殖和進(jìn)展與多種細(xì)胞周期調(diào)控因子的異常密切相關(guān)。目前研究發(fā)現(xiàn)抑癌基因p27是細(xì)胞周期重要的負(fù)性調(diào)控因子。屬于F-box蛋白的S期激酶相關(guān)蛋白2(S-phase kinase associated protein 2，Skp2)特異作用于磷酸化的p27蛋白，通過泛素-蛋白酶體途徑降解，導(dǎo)致p27蛋白表達(dá)迅速下降，由此引

2、起的細(xì)胞周期調(diào)控異常與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。牙齦癌是常見的口腔頜面部惡性腫瘤，在口腔鱗癌的構(gòu)成比中居第二或第三位，而且有較高的轉(zhuǎn)移率及復(fù)發(fā)率。國(guó)內(nèi)尚未見有關(guān)p27與Skp2蛋白和牙齦癌發(fā)生和發(fā)展相關(guān)性的報(bào)道。在本研究中，我們通過免疫組化的方法檢測(cè)p27與Skp2蛋白在牙齦癌中的表達(dá)，旨在探討p27、Skp2蛋白在牙齦癌發(fā)生發(fā)展中的作用。 方法：選取存檔的46例牙齦癌和22例正常牙齦組織蠟塊，分為試驗(yàn)組和對(duì)照組。將每個(gè)蠟塊切為4

3、-5μm的切片，共切4張，1張皿染色，1張作為陰性對(duì)照，其余2張分別行p27與Skp2染色。方法如下：石蠟切片常規(guī)脫蠟至水；5％H<,2>O<,2>甲醇振洗25分鐘，以封閉內(nèi)源性過氧化物酶活性；微波抗原修復(fù)，92-98℃×15分鐘，室溫冷卻；正常山羊血清封閉，37℃孵育30分鐘；傾去血清，滴加一抗，4℃過夜；滴加生物素化二抗，37℃孵育25分鐘；滴加辣根酶標(biāo)記的鏈酶卵白素，37℃孵育20分鐘；最后DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水、透明、封片

4、。除血清封閉步驟外，以上各步后均以PBS振洗5分鐘×3次。用已知p27、Skp2陽性的乳腺癌標(biāo)本作為陽性對(duì)照；以。PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。以細(xì)胞核或漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒者為陽性，p27和Skp2陽性細(xì)胞為棕黃色顆粒位于細(xì)胞核或胞核伴胞質(zhì)內(nèi)，而僅胞質(zhì)內(nèi)著色為非特異性染色。所有切片采用雙盲法由兩位病理科醫(yī)生獨(dú)立評(píng)估。隨機(jī)在400倍光鏡下觀察至少10個(gè)視野，在每個(gè)視野內(nèi)計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，取其平均值為該病例的細(xì)胞陽性率。其細(xì)胞陽性數(shù)>50％為

5、高表達(dá)，<50％為低表達(dá)。 采用Man-Whitney檢驗(yàn)p27和Skp2蛋白在牙齦癌與正常黏膜組織中的表達(dá)差異；Spearman等級(jí)相關(guān)分析p27、Skp2蛋白的表達(dá)與臨床病理資料之間的相互關(guān)系以及p27和Skp2表達(dá)之間的相關(guān)性。所有資料均在SPSS 12.0軟件下操作。P<0.05為統(tǒng)計(jì)學(xué)差異有顯著性。 結(jié)果：1.p27蛋白在牙齦癌細(xì)胞胞核或胞核伴胞質(zhì)內(nèi)染色陽性，而在正常黏膜組織中的染色陽性明顯增強(qiáng)，Skp2蛋白在

6、牙齦癌細(xì)胞核部位染色陽性，低分化的癌細(xì)胞常出現(xiàn)Skp2蛋白染色強(qiáng)陽性，而在正常黏膜組織中的基底細(xì)胞偶爾可見胞核Skp2陽性。在牙齦癌中p27蛋白的陽性率(63.04％)顯著低于正常黏膜組織(90.91％)(x <'2>=5.74，P<0.05)。Skp2蛋白在牙齦癌中的陽性率(32.61％)顯著高于正常黏膜組織(4.55％)(x <'2>=6.5 1，P<0.05)。 2.p27蛋白陽性表達(dá)率與腫瘤的病理分級(jí)呈負(fù)相關(guān)(P<0.0

7、5)，而Skp2蛋白陽性表達(dá)率則與以上臨床病理特征呈正相關(guān)(P<0.05)；二者的陽性表達(dá)率與牙齦癌患者的年齡、性別無統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著相關(guān)性(P>0.05)。 3.Spearman等級(jí)相關(guān)分析表明，在牙齦癌組織中，p27和Skp2蛋白表達(dá)之間呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。 結(jié)論：1.在正?？谇火つそM織和牙齦癌組織中，均有p27與Skp2的表達(dá)。但在牙齦癌中p27蛋白的表達(dá)明顯降低，而Skp2蛋白在牙齦癌中的陽性率顯著高于正常黏膜組織。