小鼠肝癌高低淋巴道轉(zhuǎn)移株差異基因表達譜分析及窖蛋白-1在淋巴道轉(zhuǎn)移中的作用.pdf

1、腫瘤轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤患者的主要死因。腫瘤轉(zhuǎn)移機制的闡明，對認識腫瘤的生物學本質(zhì)具有理論意義。腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移的方式包括直接播散、血道轉(zhuǎn)移、淋巴道轉(zhuǎn)移、種植轉(zhuǎn)移幾種。其中淋巴道轉(zhuǎn)移是最常見的方式，也是腫瘤轉(zhuǎn)移的早期跡象，因此及早發(fā)現(xiàn)微小的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶是控制腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵。近年來對于腫瘤淋巴道轉(zhuǎn)移的研究日益增多，很多淋巴道轉(zhuǎn)移相關(guān)分子陸續(xù)被發(fā)現(xiàn)，學者們希望通過這些分子作為突破點，尋找阻斷及治療腫瘤淋巴道轉(zhuǎn)移的最佳手段。 為了探討這種來源相

2、同卻具有不同的生物學行為及特性的腫瘤細胞間在基因表達譜上的差異，本實驗采用芯片技術(shù)篩選HCaF、HCaP的差異表達基因，旨在鑒別腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因，并為基因治療尋找合適的靶位點。同時，在芯片顯示的差異表達基因中挑選8個基因，用RT-PCR及Westernblot進行了驗證。在這些差異基因中，我們進一步對窖蛋白-1基因在一系列小鼠肝癌細胞系中的表達及其在肝癌細胞淋巴道轉(zhuǎn)移中的作用進行了研究。 RT-PCR及Westernblot的結(jié)

3、果顯示本實驗采用的基因芯片重復性良好，質(zhì)量穩(wěn)定。本實驗采用Clonetech的基因芯片檢測了小鼠肝癌細胞系Hca-F、Hca-P細胞中1185個基因的表達情況，篩選出69個差異表達基因。用Clonetech的結(jié)果分析軟件MicroarraySuitSoftware5.0.對Hca-F、Hca-P細胞兩張芯片進行分析，發(fā)現(xiàn)Hca-F、Hca-P細胞中差異在兩倍以上的基因(F/P＞2或F/P＜0.5)有69個，Hca-F表達上調(diào)的基因47個

4、，Hca-P表達上調(diào)的基因22個，3倍以上的16個，Hca-F表達上調(diào)的10個，Hca-P表達上調(diào)的6個。69個差異基因編碼的蛋白涉及到細胞生長的各個方面，包括細胞表面抗原、核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子、轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)蛋白、細胞粘附分子、載體蛋白、離子通道蛋白、細胞外基質(zhì)蛋白、細胞代謝相關(guān)蛋白、應激反應蛋白、跨膜轉(zhuǎn)運蛋白、死亡受體配體、RNA調(diào)節(jié)蛋白、生長因子及其受體、白細胞介素類生長因子、激素受體及各種受體、蛋白激酶、磷酸及磷酸化酶、鈣結(jié)合蛋白、基質(zhì)金屬

5、蛋白酶、細胞骨架蛋白、細胞周期蛋白、DNA損傷修復蛋白、DNA連接酶及各類細胞內(nèi)誘導劑、效應劑、調(diào)節(jié)劑，還有3個功能不明的蛋白，分別是5-azacytidineinducedgene1、crystallin，gammaS及programmedcelldeath4。在具有高淋巴道轉(zhuǎn)移潛能的Hca-F細胞中，生長因子受體類的癌基因、以及與細胞代謝、信號轉(zhuǎn)導、蛋白質(zhì)合成等相關(guān)的基因明顯活躍，而在低轉(zhuǎn)移株中，誘導細胞凋亡及與DNA損傷修復的基因

6、則表達上調(diào)，如誘導凋亡的TWEAK基因在低轉(zhuǎn)移株中表達上調(diào)，而在高轉(zhuǎn)移株中表達下調(diào)，證實腫瘤淋巴道轉(zhuǎn)移過程中基因改變的多樣性。 本研究通過基因芯片、半定量RT-PCR、蛋白免疫印跡實驗篩選出小鼠高低淋巴道轉(zhuǎn)移株的差異表達基因，這些基因在細胞惡性轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)移潛能的獲得中發(fā)揮著不同作用。雖然目前對大部分差異表達基因的功能還不了解，但已獲得的結(jié)果對淋巴道轉(zhuǎn)移的基因診斷、治療及研究等提供了有益的信息。同時，研究中發(fā)現(xiàn)窖蛋白-1在小鼠肝癌細