姜黃素的提取、分離及抑菌、抗腫瘤活性研究.pdf

1、近年來(lái)，隨著癌癥發(fā)病率的不斷升高，天然藥物抗腫瘤作用日益成為研究熱點(diǎn)，尤其是近年來(lái)國(guó)外也逐步重視對(duì)天然藥物的應(yīng)用。
　　本文以常用中藥姜黃為材料，通過(guò)探索姜黃素的測(cè)定方法、分離方法、超高壓提取方法，揮發(fā)油成分的鑒定，姜黃素的抑菌、抗腫瘤活性及揮發(fā)油抑菌的檢測(cè)，建立了姜黃從有效成分提取到活性鑒定的實(shí)驗(yàn)方法。
　　實(shí)驗(yàn)具體分為七部分:
　　一、姜黃素的測(cè)定方法
　　通過(guò)對(duì)分光光度法及高效液相色譜法對(duì)姜黃素總含量的測(cè)定

2、，發(fā)現(xiàn)姜黃素的含量與分光光度法中的吸光度及高效液相色譜法中的峰面積均成線性關(guān)系，且回收率及精密度實(shí)驗(yàn)均顯示兩種方法可靠穩(wěn)定，但將兩種方法的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)光度法的測(cè)定結(jié)果略高于色譜法。
　　二、姜黃素的分離方法
　　分別使用C18與C30柱，考察了三種姜黃素的分離效果，結(jié)果表明使用甲醇-水等度洗脫，在相同的洗脫條件下，三種姜黃素在C30柱上的分離效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于C18柱，使用組成簡(jiǎn)單的甲醇-水為流動(dòng)相，不必使用復(fù)雜的梯度

3、洗脫程序就可以獲得基線分離，并且分離時(shí)間也令人滿意。并根據(jù)三種組分的化學(xué)結(jié)構(gòu)、相對(duì)極性、色譜保留時(shí)間及紫外光譜特征分析，對(duì)三個(gè)色譜峰進(jìn)行了鑒定，分別為去二甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素。
　　三、氣相色譜-質(zhì)譜分離與鑒定姜黃揮發(fā)油成分
　　從姜黃提取的揮發(fā)油中分離出32個(gè)色譜峰，共鑒定了22個(gè)，占被測(cè)總量的85.94％，其主要成分為:芳姜黃酮(16.06％)、β-姜黃烯(11.40％)、β-倍半水芹烯(7.27％)、大

4、根香葉酮(6.86％)、表-α-綠芹烯(5.85％)、芳-姜黃烯(5.43％)、α-姜黃酮(5.38％)、桉樹(shù)腦(5.25％)和苯甲醇(5.24％)。這與文獻(xiàn)報(bào)道的姜黃揮發(fā)油的組成主要以萜類化合物為主基本一致。
　　四、超高壓提取姜黃素的工藝參數(shù)優(yōu)化
　　在測(cè)定提取溶劑、溶劑濃度、壓力、提取時(shí)間、固液比、提取次數(shù)等因素對(duì)提取率的影響基礎(chǔ)上，通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)確定超高壓提取過(guò)程中的最優(yōu)因素組合。通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)UHPE最佳提取工藝條件為

5、:乙醇濃度70％，液固比為45:1，壓力為350MPa，提取時(shí)間3.5 min。在上述最佳提取工藝條件下，重復(fù)提取3次，總姜黃素的平均提取率為28.82 mg·g-1，大于正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果中的最高值(28.49 mg·g-1)，說(shuō)明利用正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化UHPE提取姜黃素的提取工藝是成功的。
　　五、姜黃素的抑菌作用研究
　　提取姜黃素，利用平板打孔法和藥液二倍稀釋法對(duì)抑菌作用進(jìn)行定性、定量測(cè)定。結(jié)果:一定濃度的姜黃色素對(duì)大腸桿菌、枯

6、草芽孢桿菌、酵母菌、黑曲霉、白地霉都有抑制作用，其抑菌作用強(qiáng)弱的順序?yàn)?大腸桿菌>黑曲霉>枯草芽孢桿菌>酵母菌>白地霉，對(duì)大腸桿菌的最低抑菌濃度是0.78mg/ml，對(duì)黑曲霉的最低抑菌濃度是1.56mg/ml，對(duì)枯草芽孢桿菌的最低抑菌濃度是1.56mg/ml，對(duì)酵母菌的最低抑菌濃度時(shí)3.125mg/ml，對(duì)白地霉的最低抑菌濃度是6.25mg/ml。
　　六、姜黃揮發(fā)油的抑菌活性研究
　　用石油醚提取姜黃揮發(fā)油，除去石油醚，收

7、集揮發(fā)油，配制成相應(yīng)的濃度。利用平板打孔法和藥液二倍稀釋法對(duì)抑菌作用進(jìn)行定性、定量測(cè)定。結(jié)果顯示姜黃揮發(fā)油對(duì)大腸桿菌、枯草桿菌、酵母菌、產(chǎn)阮假絲酵母菌和白地霉均有抑菌作用，且大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、酵母菌、產(chǎn)阮假絲酵母的最低抑菌濃度為6.25mg/ml，白地霉的最低抑菌濃度為3.125mg/ml，但對(duì)黑曲霉無(wú)抑菌作用。其中姜黃揮發(fā)油對(duì)白地霉的抑制作用最強(qiáng)。
　　七、姜黃素對(duì)HepG2細(xì)胞增殖的影響
　　用不同濃度的姜黃素處理