蘆丁、姜黃素有機(jī)硒化合物的合成及抗腫瘤活性研究.pdf

1、目的：隨著微量元素硒的生物作用的不斷深入，有機(jī)硒化合物作為藥物的研究開發(fā)越來(lái)越受到重視。已往對(duì)中藥活性成分蘆丁和姜黃素結(jié)合某些金屬離子和細(xì)胞活性研究已經(jīng)有所報(bào)道，但從未對(duì)結(jié)合硒元素有過(guò)任何研究。本實(shí)驗(yàn)的目的在于利用蘆丁、姜黃素與微量元素硒來(lái)合成出新型的有機(jī)硒化合物，鑒定及確認(rèn)結(jié)構(gòu)，并考察目標(biāo)產(chǎn)物的體外抗腫瘤細(xì)胞活性。 方法：參照成熟的工藝，從槐米中提取出蘆丁，計(jì)算最終產(chǎn)率、測(cè)定熔點(diǎn)，參比對(duì)照其理論值。取精品蘆丁和姜黃素跟氯氧化硒

2、反應(yīng)合成蘆丁-硒、姜黃素-硒化合物，預(yù)實(shí)驗(yàn)設(shè)置3個(gè)不同的反應(yīng)時(shí)間，3個(gè)不同梯度的原料摩爾比，通過(guò)薄層色譜(TLC)、熔點(diǎn)測(cè)定、紫外(UV)等手段確定最適宜的反應(yīng)條件。然后在最佳合成條件下進(jìn)行反應(yīng)，產(chǎn)物經(jīng)水洗、萃取、色譜層析等不同分離純化操作得到最終目標(biāo)化合物。將目標(biāo)物通過(guò)氫化物發(fā)生等離子發(fā)射光譜法(HG-ICP-AES)測(cè)定含硒量，然后經(jīng)紫外、紅外(IRT)、LC-MS及1HNMR確認(rèn)，得出目標(biāo)物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。之后，以順鉑為對(duì)照，采用四甲

3、基偶氮唑鹽比色分析法(MTT法)測(cè)定蘆丁和蘆丁-硒化合物對(duì)CNE2(鼻咽癌)、HEP2(喉癌)、BEL-7404(肝癌)、KB(口腔上皮癌)及HELA(宮頸癌)的作用；采取同樣的方法測(cè)定姜黃素和姜黃素-硒化合物對(duì)BGC823(胃癌)、CNE2(鼻咽癌)、HL-60(白血病)、KB(口腔上皮癌)、LS174T(結(jié)腸癌)、PC3(前列腺癌)及HELA(宮頸癌)的作用。 結(jié)果：槐米中蘆丁產(chǎn)率為15.3％，mp:185～187℃。合成出

4、蘆丁-硒產(chǎn)物，產(chǎn)率51.2％，熔點(diǎn)為188.0～190.0℃。經(jīng)過(guò)結(jié)構(gòu)鑒定，判斷蘆丁3’，4’位鄰羥基上的氫被硒原子取代，形成一個(gè)五元環(huán)結(jié)構(gòu)，同時(shí)，化合物上還結(jié)合了兩分子的水；合成出姜黃素-硒產(chǎn)物，產(chǎn)率26.9％，熔點(diǎn)為185.0～187.0℃。經(jīng)過(guò)結(jié)構(gòu)鑒定，判斷為姜黃素上的β-2酮部分有一個(gè)羰基轉(zhuǎn)變?yōu)橄┐际脚c硒相接，另外一個(gè)羰基提供孤對(duì)電子與硒配位，而另一分子的姜黃素也以同樣方式與硒連接，硒原子還以硒氧雙鍵連接上一個(gè)氧原子。

5、MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：蘆丁一硒化合物對(duì)CNE2、HEP2、BEL-7404、KB及HELA腫瘤細(xì)胞有顯著的抑制作用，IC50分別為26.78μg·ml-1、0.42μg·ml-1、8.37μg·ml-1、1.89μg·ml-1和0.35μg·ml-1，蘆丁則表現(xiàn)為促進(jìn)CNE2、HEP2和BEL-7404細(xì)胞的體外增殖；姜黃素一硒化合物對(duì)HEIA、KB、PC3、HL-60、BGC823有抑制作用，IC50分別為2.54μg·ml-1、13.

6、74μg·ml-1、21.76μg·ml-1、30.85μg·ml-1、45.71μg·ml-1，效果要好于姜黃素，但姜黃素-硒化合物對(duì)CNE2和LS174T腫瘤細(xì)胞效果不明顯。 結(jié)論：合成出的化合物經(jīng)原子發(fā)射光譜、紫外、紅外、液.質(zhì)聯(lián)用和核磁共振譜圖確認(rèn)，是兩種新型的有機(jī)硒化合物，并且在抗腫瘤細(xì)胞增殖方面，蘆丁-硒化合物對(duì)考察的腫瘤細(xì)胞抑制作用大小為HELA＞HEP2＞KB＞BEL-7404＞CNE2，同時(shí)，姜黃素-硒化合物對(duì)