姜黃素結(jié)構(gòu)衍生物抗腫瘤活性篩選及其機理初探.pdf

1、腫瘤疾病已經(jīng)嚴重威脅人類的健康?；瘜W治療是目前腫瘤治療的主要方法之一。從天然化合物中尋找新的抗腫瘤活性藥物,以抗腫瘤活性好的化合物為先導進行結(jié)構(gòu)修飾,以期改善其理化性質(zhì),提高抗腫瘤效果降低毒性,為開發(fā)抗腫瘤新藥的思路之一。本文采用MTT比色法在C6、HepG2、Bel-7402和SMMC-7721等四種腫瘤細胞模型上對一系列姜黃素的結(jié)構(gòu)衍生物進行了抗腫瘤活性的篩選,并得到了活性較好的兩個化合物ccm-5和ccm-14;利用Annexin

2、V-EGFP/PI凋亡檢測試劑盒以及流式細胞儀檢測化合物誘導SMMC-7721細胞凋亡的作用;利用PI染色及流式細胞儀檢測化合物對SMMC-7721細胞周期分布的影響;采用Western-Blot方法檢測化合物對細胞凋亡相關(guān)的蛋白活性表達水平,初步探討其可能機理,為抗腫瘤藥物先導分子的發(fā)現(xiàn)提供實驗依據(jù)。1.抗腫瘤活性化合物的篩選及其IC50測定為了考察本研究所在研的天然產(chǎn)物,重點是姜黃素結(jié)構(gòu)衍生物抗腫瘤活性大小,確定了四種腫瘤細胞的MT

3、T篩選條件,對一系列化合物進行了抗腫瘤活性篩選,并測定其IC50。結(jié)果顯示有較多化合物均具有較好的抗腫瘤活性,其中最好的為姜黃素結(jié)構(gòu)衍生物ccm-5和ccm-14,且它們抑制細胞增殖的作用具有劑量依賴性。2.化合物ccm-5、ccm-14誘導SMMC-7721細胞凋亡的檢測為了研究ccm-5和ccm-14抑制腫瘤細胞增殖的作用是否通過凋亡的方式誘導,我們利用流式細胞技術(shù)對這些化合物作用SMMC-7721細胞后的凋亡率進行了檢測,并用熒光

4、顯微鏡觀察細胞形態(tài)。結(jié)果顯示化合物可以濃度依賴性地誘導細胞凋亡,并以早期凋亡為主。而熒光顯微鏡下觀察結(jié)果與流式細胞儀檢測結(jié)果基本一致。3.化合物ccm-5、ccm-14對SMMC-7721細胞周期影響的檢測一般而言,抗腫瘤化合物誘導細胞凋亡可能都具有細胞周期依賴性,故而我們采用PI染色法,利用流式細胞儀檢測了化合物ccm-5以及ccm-14對SMMC-7721細胞周期分布的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),兩種化合物均可使細胞周期各時相的細胞百分數(shù)發(fā)生明

5、顯改變。主要表現(xiàn)為隨著濃度的提高,使G0/G1期細胞減少,S期以及G2/M期細胞增加,凋亡峰SubG1峰逐漸增大。且這種作用在ccm-14上體現(xiàn)更明顯。結(jié)果提示這些化合物可劑量依賴性地使細胞停滯在S期和G2/M期,阻止G2/M期細胞向G0/G1期移行,最終誘導細胞凋亡,而且可能以G2/M期為主。4.化合物ccm-5、ccm-14對細胞凋亡調(diào)控因子caspase-3蛋白表達活性的影響因caspase-3是細胞凋亡的關(guān)鍵執(zhí)行者,故我們采用W