培美曲塞和吉非替尼不同時(shí)序應(yīng)用對人肺腺癌細(xì)胞的作用.pdf

1、目的：探討培美曲塞與吉非替尼不同時(shí)序應(yīng)用對人肺腺癌細(xì)胞PC-9和A549生長和凋亡的影響,從而獲取最佳給藥方式,并通過體外研究培美曲塞與吉非替尼按不同時(shí)序應(yīng)用后對各組細(xì)胞周期及EGFR信號(hào)通路及TS酶蛋白的影響闡述其可能機(jī)制。
　　方法：1、體外培養(yǎng)人肺腺癌細(xì)胞PC-9、A549,MTT法檢測不同濃度培美曲塞與吉非替尼單藥作用PC-9、A549細(xì)胞24h、48h、72h的增殖抑制作用,并根據(jù)細(xì)胞增殖抑制率和藥物濃度繪制量-效曲線,

2、計(jì)算出培美曲塞和吉非替尼單藥在PC-9、A549細(xì)胞中的半數(shù)抑制濃度(IC50)。2、固定濃度培美曲塞聯(lián)合吉非替尼按不同時(shí)序作用于PC-9、A549細(xì)胞后,MTT法檢測兩藥不同時(shí)序應(yīng)用對肺腺癌細(xì)胞的增殖抑制作用,比較各組細(xì)胞增殖抑制情況。3、流式細(xì)胞儀檢測培美曲塞和吉非替尼不同時(shí)序應(yīng)用后各組細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期分布情況。4、Western印跡法檢測培美曲塞和吉非替尼不同時(shí)序應(yīng)用對EGFR下游信號(hào)通路蛋白[磷酸化表皮生長因子受體(phosp

3、horyed EGFR,p-EGFR)、磷酸化胞外信號(hào)調(diào)節(jié)酶(phosphorylated ERK,p-ERK)和磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated AKT,p-AKT)及胸苷酸合成酶(thymidylate synthetase,TS)在蛋白水平表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：1、吉非替尼和培美曲塞單藥作用肺腺癌細(xì)胞PC-9、A549均能抑制細(xì)胞生長,呈時(shí)間和濃度依賴性。吉非替尼作用于 A549細(xì)胞(野生型)72h的IC50

4、為8.937±0.356μmol/L,作用于PC-9細(xì)胞(突變型)72h的IC50為0.049±0.004μmol/L,吉非替尼在A549細(xì)胞中作用72h的IC50約為PC-9細(xì)胞中的近200倍。培美曲塞作用于PC-9細(xì)胞72h的IC50為0.483±0.040μmol/L,作用于A549細(xì)胞72h的IC50為2.742±0.505μmol/L。2、以固定濃度培美曲塞聯(lián)合吉非替尼,各濃度組中培美曲塞序貫吉非替尼、培美曲塞同步聯(lián)合吉非替尼

5、對PC-9、A549細(xì)胞作用的增殖抑制率和凋亡率均較單藥組明顯提高(P<0.05),且培美曲塞序貫吉非替尼作用兩種細(xì)胞的增殖抑制率和凋亡率較培美曲塞同步聯(lián)合吉非替尼效應(yīng)更加顯著(P<0.05),而吉非替尼序貫培美曲塞較單藥組抑制率和凋亡率均無顯著差異。3、培美曲塞提高 EGFR、AKT、ERK磷酸化水平,而吉非替尼表現(xiàn)為抑制作用,同時(shí)吉非替尼降低TS酶表達(dá)。培美曲賽序貫吉非替尼、培美曲賽同步聯(lián)合吉非替尼作用后,較單藥組均進(jìn)一步抑制EGF