Ambra1介導的自噬與凋亡在結腸癌中的研究.pdf

1、目的:Ambra1是一個與自噬相關的重要基因,越來越多的研究揭示了Ambra1可以通過促進自噬從而發(fā)揮的促生存的作用。在Ambra1在胚胎干細胞中可以調控Beclin1依賴的自噬。然而,Ambra1在與結腸癌細胞中自噬相關的信號通路中扮演何種的角色,這方面的研究仍然未見報道,在本研究當中,我們就Ambra1相關的自噬與凋亡應用結腸癌細胞株展開討論。
　　方法:1.使用人結腸癌細胞SW620,饑餓誘導SW620細胞株發(fā)生自噬,通過W

2、setern blot技術檢測自噬標志性蛋白LC3的表達,并且采用透射電鏡以及免疫熒光進一步確定結腸癌細胞株SW620中自噬體的形成,同時用Western blot檢測目標蛋白Ambra1表達的變化2.使用凋亡誘導劑staurosporine(十字胞堿)和etoposide(足葉乙苷)處理SW620細胞株,檢測Ambra1蛋白表達的變化;使用calpain抑制劑以及caspase抑制劑,運用Western blot的方法研究Ambra1

3、在SW620細胞株凋亡時發(fā)生降解的機制3.使用Ambra1-siRNA干擾Ambra1 RNA后觀察Ambra1對于SW620細胞株的自噬、凋亡和增殖的作用
　　結果:1.饑餓誘導的SW620結腸癌細胞株自噬與Ambra1蛋白的表達成正相關即自噬過程中Ambra1蛋白的表達增高。2.凋亡誘導過程中SW620結腸癌細胞株自噬相關蛋白Ambra1被不斷降解,caspase和calpain可能參與了Ambra1蛋白的降解。3.通過使用A

4、mbra1相應的干擾RNA瞬時轉染SW620細胞,我們發(fā)現(xiàn)SW620結腸癌細胞株中干擾組相對于空轉組對于 staurosporine或者 etoposide誘導的凋亡更加的敏感,并且在干擾組SW620結腸癌細胞株中由饑餓誘導的自噬程度顯著的降低。
　　結論:在結腸癌細胞株SW620中,腫瘤細胞通過自噬抵抗外部環(huán)境給予的壓力,Ambra1可以通過結合Beclin1正性調控自噬的同時負性調控凋亡,提示:Ambra1在結腸癌中調節(jié)自噬以