吳茱萸堿對人結(jié)腸癌細(xì)胞自噬與增殖的影響.pdf

1、目的:
　　 1.探討吳茱萸堿(evodiamine,Evo)對人結(jié)腸癌lovo細(xì)胞、人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞和人肺癌A549細(xì)胞生長的影響；
　　 2.進(jìn)一步研究吳茱萸堿抑制lovo細(xì)胞生長的機(jī)制；
　　 3.探討吳茱萸堿對結(jié)腸癌lovo細(xì)胞自噬的影響；
　　 4.通過自噬阻斷實(shí)驗(yàn),明確自噬在吳茱萸堿對腫瘤細(xì)胞殺傷中的所用；
　　 5.進(jìn)一步探討自噬在吳茱萸堿所致細(xì)胞殺傷作用中的機(jī)制,并

2、明確其在化療及中藥治療腫瘤過程中的作用。
　　 方法:
　　 1.用MTT法檢測吳茱萸堿對人結(jié)腸癌lovo細(xì)胞、人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞以及人肺癌A549細(xì)胞生長的影響。聯(lián)合光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察,明確吳茱萸堿對結(jié)腸癌lovo細(xì)胞的殺傷作用；
　　 2.使用流式細(xì)胞術(shù),觀察吳茱萸堿作用結(jié)腸癌lovo細(xì)胞后細(xì)胞周期和凋亡的變化；
　　 3.使用不同濃度的吳茱萸堿干預(yù)荷瘤裸鼠,并繪制腫瘤生長曲線圖

3、；
　　 4.用丹(磺)酰戊二胺(monodansylcadaverin,MDC)熒光染色標(biāo)記自噬小體后,在激光共聚焦顯微鏡觀察自噬小體的多寡,了解自噬現(xiàn)象的發(fā)生情況；
　　 5.丹(磺)酰戊二胺熒光染色并裂解細(xì)胞后,熒光分光光度計(jì)測定熒光強(qiáng)度,并進(jìn)行定量分析；
　　 6.用Western Blot法檢測吳茱萸堿作用結(jié)腸癌lovo細(xì)胞后,微管相關(guān)蛋白輕鏈3(microtubule-associated prote

4、in1 light chain3,MAP LC3)的表達(dá)；
　　 7.AnnexinⅤ法檢測聯(lián)合應(yīng)用吳茱萸堿和3-MA對結(jié)腸癌lovo細(xì)胞凋亡的影響；
　　 8.聯(lián)合應(yīng)用吳茱萸堿和自噬阻滯劑3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA),檢測他們對結(jié)腸癌lovo細(xì)胞活力的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1.吳茱萸堿不僅抑制lovo細(xì)胞生長(P<0.05),而且也促進(jìn)MDA-MB-231細(xì)胞增殖(P

5、<0.05),但對A549細(xì)胞無明顯作用(P>0.05)；
　　 2.吳茱萸堿不僅誘導(dǎo)結(jié)腸癌lovo細(xì)胞發(fā)生凋亡；而且可阻滯結(jié)腸癌lovo細(xì)胞停滯于S期；
　　 3.吳茱萸堿可抑制荷瘤裸鼠的腫瘤生長(P<0.05)；
　　 4.與自然生長組比較,吳茱萸堿也可誘導(dǎo)結(jié)腸癌lovo細(xì)胞發(fā)生自噬,并呈時(shí)間.濃度梯度效應(yīng)(P<<0.05)；
　　 5.使用3-甲基腺嘌呤阻斷自噬后,可增強(qiáng)吳茱萸堿對結(jié)腸癌lovo細(xì)胞

6、殺傷作用；
　　 6.吳茱萸堿誘導(dǎo)的自噬,對其細(xì)胞殺傷作用具有保護(hù)作用；
　　 7.吳茱萸堿誘導(dǎo)自噬對其細(xì)胞殺傷作用,與阻礙lovo細(xì)胞凋亡有關(guān)。
　　 結(jié)論:
　　 1.吳茱萸堿具有抑制lovo細(xì)胞生長的作用,且為非廣譜抗腫瘤活性物質(zhì)；
　　 2.吳茱萸堿對結(jié)腸癌lovo細(xì)胞的抑制作用,很可能是通過阻滯細(xì)胞于S期并誘導(dǎo)其凋亡來實(shí)現(xiàn)的；
　　 3.吳茱萸堿誘導(dǎo)結(jié)腸癌lovo細(xì)胞發(fā)生自噬,自