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文檔簡介
1、FTY720,亦稱芬戈莫德,是一種廣泛使用的免疫調節(jié)劑在多發(fā)性硬化癥和多器官移植,也是一種重要的蛋白磷酸酶2A(PP2A)激活劑。以此為基礎,最近大量的研究表明FTY720對多種腫瘤具有毒性作用。然而在結直腸癌(CRC),F(xiàn)TY720毒性的機制仍不清楚,尤其是藥物與細胞自噬的關系。
目的:
探索FTY720對結腸癌細胞系自噬產(chǎn)生的影響及可能的相關機制。
方法:
使用CCK8、平板克隆試驗、流式凋亡
2、試驗、Western blot試驗檢測凋亡相關抗體以及流式周期試驗驗證FTY720對結腸癌細胞系生理功能產(chǎn)生的影響。用透射電子顯微鏡、共聚焦電子顯微鏡、Western blot試驗檢測自噬相關抗體驗證FTY720對結腸癌細胞自噬產(chǎn)生的影響。使用3-MA抑制自噬后觀察細胞活性以判斷自噬起保護作用還是細胞毒性作用。使用si-RNA干擾CIP2A觀察LC3表達判斷FTY720促進自噬的過程中CIP2A是否參與其中。
結果:
3、 FTY720促進自噬體的形成、LC3-II聚集和增多,說明FTY720對結直腸癌細胞毒性作用過程中自噬參與其中。此外,使用自噬的特異性抑制劑3-MA抑制自噬后,F(xiàn)TY720的細胞毒性增強,提示自噬在FTY720本身的細胞毒性作用過程中起保護作用。保護性自噬過程受到與耐藥相關的內源性PP2A抑制因子CIP2A的影響。
結論:
FTY720對結腸癌細胞有明顯的細胞毒性作用,然而保護性自噬卻是發(fā)生FTY720抵抗的危險因
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