FTY720在結(jié)腸癌細(xì)胞中對(duì)自噬的影響及相關(guān)機(jī)制的探索.pdf

1、FTY720，亦稱芬戈莫德，是一種廣泛使用的免疫調(diào)節(jié)劑在多發(fā)性硬化癥和多器官移植，也是一種重要的蛋白磷酸酶2A(PP2A)激活劑。以此為基礎(chǔ)，最近大量的研究表明FTY720對(duì)多種腫瘤具有毒性作用。然而在結(jié)直腸癌(CRC)，F(xiàn)TY720毒性的機(jī)制仍不清楚，尤其是藥物與細(xì)胞自噬的關(guān)系。
　　目的:
　　探索FTY720對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞系自噬產(chǎn)生的影響及可能的相關(guān)機(jī)制。
　　方法:
　　使用CCK8、平板克隆試驗(yàn)、流式凋亡

2、試驗(yàn)、Western blot試驗(yàn)檢測(cè)凋亡相關(guān)抗體以及流式周期試驗(yàn)驗(yàn)證FTY720對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞系生理功能產(chǎn)生的影響。用透射電子顯微鏡、共聚焦電子顯微鏡、Western blot試驗(yàn)檢測(cè)自噬相關(guān)抗體驗(yàn)證FTY720對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞自噬產(chǎn)生的影響。使用3-MA抑制自噬后觀察細(xì)胞活性以判斷自噬起保護(hù)作用還是細(xì)胞毒性作用。使用si-RNA干擾CIP2A觀察LC3表達(dá)判斷FTY720促進(jìn)自噬的過程中CIP2A是否參與其中。
　　結(jié)果:
　

3、　FTY720促進(jìn)自噬體的形成、LC3-II聚集和增多，說明FTY720對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞毒性作用過程中自噬參與其中。此外，使用自噬的特異性抑制劑3-MA抑制自噬后，F(xiàn)TY720的細(xì)胞毒性增強(qiáng)，提示自噬在FTY720本身的細(xì)胞毒性作用過程中起保護(hù)作用。保護(hù)性自噬過程受到與耐藥相關(guān)的內(nèi)源性PP2A抑制因子CIP2A的影響。
　　結(jié)論:
　　FTY720對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞有明顯的細(xì)胞毒性作用，然而保護(hù)性自噬卻是發(fā)生FTY720抵抗的危險(xiǎn)因