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文檔簡介
1、目的:本實驗?zāi)康氖怯^察比索洛爾是否對動脈粥樣硬化有防治作爾,觀察比索洛爾對動脈粥樣硬化大鼠血NO及血管MMP9,VEGF表達(dá)的影響。方法:1.選取50只6周齡雄性wister大鼠,體重約180±40g,隨機(jī)分為⑴A組(空白對照組):給予普通飼料;⑵B組(模型組即動脈粥樣硬化組):給予高脂飼料(含豬油10%,丙硫氧嘧啶0.2%,白糖7%,膽固醇2%,膽酸鈉0.5%及普通飼料80.3%),并每間隔一個月分三天腹腔注射總量為60萬u/kg的V
2、itD注射液。⑶C組(比索洛爾干預(yù)組1):給予高脂飼料,及每天灌胃比索洛爾1.25mg/kg/只,同樣并每間隔一個月分三天腹腔注射總量為60萬u/kg的VitD注射液。⑷D組(比索洛爾干預(yù)組2):給予高脂飼料,及每天灌胃比索洛爾2.5mg/kg/只,同樣每間隔一個月分三天腹腔注射總量為60萬u/kg的VitD注射液。(5)E組(比索洛爾干預(yù)組3):給予高脂飼料,并每天灌胃比索洛爾5mg/kg/只,同樣每間隔一個月分三天腹腔注射總量為60
3、萬u/kg的VitD注射液。2.于13周末先將大鼠麻醉,后抽取大鼠心腔內(nèi)血液4ml,將血液注入含0.5%枸櫞酸鈉的檢測管中,將裝有血液的檢測管放入離心機(jī)中,以2000r/min的速度離心后,取上清液測定血清NO及NO合酶。3將大鼠主動脈從主動脈開口處分離至腹主動脈分支處,并將分離出的主動脈從主動脈弓與胸主動脈分界處分為兩份。將主動脈弓段血管壁的脂肪及筋膜用鑷子分離掉,洗凈后做石蠟包埋固定,用固定好的石蠟塊切成4um厚度的薄片然后行HE染
4、色及免疫組化 MMP9及VEGF。6.統(tǒng)計方法:用統(tǒng)計學(xué)軟件 SPSS17.0完成實驗結(jié)果的統(tǒng)計工作,實驗結(jié)果采用均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差( X±S)表示,若方差齊,可進(jìn)行單因素方差分析,LSD法進(jìn)行組間均數(shù)兩兩比較。結(jié)果:1.病理切片可見: A組:動脈血管內(nèi)膜光滑完整,各層結(jié)構(gòu)清晰,未見泡沫細(xì)胞;B組:表層可見纖維帽,表面纖維增生紊亂,管壁向管腔明顯突出,其下可見大量泡沫細(xì)胞形成,深層可見一些脂質(zhì)沉積;C組:管壁表層仍可見纖維帽并向官腔突出,其
5、下可見多量泡沫細(xì)胞及脂質(zhì)和壞死物質(zhì)沉積,內(nèi)皮不完整;D組:表層纖維帽較薄,管壁向管腔突出不明顯,其下可見泡沫細(xì)胞及脂質(zhì)。E組:與D組相比較,程度明顯減輕,可見內(nèi)皮稍不完整及少量泡沫細(xì)胞。2.各組血清NO含量:A組:31.656±5.158,B組:8.608±2.294, C組:10.032±2.133,D組:15.988±2.393,E組:23.314±4.274。B組與 A組相比 P<0.05,C組與 B組無明顯統(tǒng)計學(xué)差異,P>0.0
6、5,D組和E組與B組相比,P值均小于0.05,D組和E組相比較有統(tǒng)計學(xué)意義P<0.05。3.各組血清NOS含量:A組:17.994±0.842,B組:10.263±1.306,C組:10.689±1.387,D組:13.464±0.921,E組:16.105±0.946。B組與 A組相比 P<0.05,C組與 B組無明顯統(tǒng)計學(xué)差異, P>0.05,D組和E組與B組相比,P值均小于0.05,D組和E組相比較有統(tǒng)計學(xué)意義P<0.05。4.各
7、組血管VEGF的平均光密度值:A組:14.526±4.725,B組:167.699±25.745,C組:161.708±30.081, D組:100.777±19.453,E組:56.857±27.685。B組與 A組相比P<0.05,C組與B組無明顯統(tǒng)計學(xué)差異,P>0.05,D組和E組與B組相比,P值均小于0.05,D組和E組相比較有統(tǒng)計學(xué)意義 P<0.05。5.各組血管MMP9的平均光密度值:A組:11.936±5.045,B組:1
8、37.577±32.548,C組:123.562±27.071,D組:83.691±20.233,E組:46.510±18.087。B組與A組相比P<0.05,C組與B組無明顯統(tǒng)計學(xué)差異,P>0.05,D組和E組與B組相比,P值均小于0.05,D組和E組相比較有統(tǒng)計學(xué)意義P<0.05。結(jié)論:1.通過給予大鼠高脂飼料及定時定量給予腹腔注射VitD可成功復(fù)制大鼠動脈粥樣硬化模型。2.本實驗中可見大鼠血 NO及NO合酶在動脈粥樣硬化模型組中明
9、顯降低,表明內(nèi)皮功能障礙參與了動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展。3.MMP9在動脈粥樣硬化模型大鼠主動脈組織中明顯升高,表明細(xì)胞外基質(zhì)降解與動脈粥樣硬化及斑塊不穩(wěn)定有密切關(guān)系。4.VEGF在動脈粥樣硬化模型大鼠主動脈組織中明顯升高,提示動脈粥樣硬化的形成與血管內(nèi)皮細(xì)胞過度增生有關(guān)。5.比索洛爾干預(yù)后,血NO及NO合酶明顯升高,組織內(nèi)VEGF及MMP9明顯下降,表明比索洛爾能改善粥樣硬化血管的血管內(nèi)皮功能,防治內(nèi)皮增生,減少細(xì)胞外基質(zhì)的降解,進(jìn)而發(fā)揮
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