中草藥對紫外線照射下真皮成纖維細(xì)胞保護作用的研究.pdf

1、目的：研究紫外線(UV)照射對真皮成纖維細(xì)胞功能的影響,篩選出對這些改變有保護作用的中草藥,確定合適的作用濃度。
　　方法：以體外培養(yǎng)人真皮成纖維細(xì)胞為研究對象,首先研究長波紫外線(UVA1,340-400nm)和中波紫外線(UVB,280-320nm)照射對細(xì)胞增殖率(CCK-8法測定)的影響。細(xì)胞接受一定劑量UVA1或UVB照射同時加入不同濃度杜仲、絞股藍(lán)、雪蓮、黃芪、雪茶提取液,觀察藥物對UV照射下細(xì)胞增殖抑制的保護作用,篩

2、選出有保護作用的中草藥并摸索合適的作用濃度。此后,研究UVA1和UVB照射對真皮成纖維細(xì)胞功能的影響,以實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-timePCR)方法測定基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-1和MMP-3mRNA水平,以酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)方法測定Ⅰ型和Ⅲ型前膠原蛋白表達(dá)水平,并研究第一步篩選出的藥物杜仲對UV照射下細(xì)胞功能改變的保護作用。
　　結(jié)果：UVA1或UVB照射可以抑制人真皮成纖維細(xì)胞的增殖,與未照射組相比,2

3、0J/cm2UVA1和40mJ/cm2UVB照射組即有顯著性差異(P＜0.01),隨著照射劑量增加,細(xì)胞增殖率逐步下降,兩者呈顯著相關(guān)性(P＜0.01)。20J/cm2UVA1或40mJ/cm2UVB照射時,MMP-1和MMP-3mRNA水平顯著增加(P＜0.01),Ⅰ型和Ⅲ型前膠原蛋白表達(dá)水平顯著下降(P＜0.01)。細(xì)胞接受20J/cm2UVA1或40mJ/cm2UVB照射同時分別加入不同濃度杜仲、絞股藍(lán)、雪蓮、黃芪、雪茶提取液,杜

4、仲提取液(0.1,1mg/ml)可以顯著減少UVA1和UVB照射對細(xì)胞增殖的抑制作用(P＜0.01),絞股藍(lán)提取液(1,10mg/ml)可以顯著減少UVA1照射對細(xì)胞增殖的抑制作用(P＜0.01)和UVB照射對細(xì)胞增殖的抑制作用(P＜0.05),雪蓮提取液僅減少UVA1對細(xì)胞增殖的抑制作用(0.1mg/ml,P＜0.05;1mg/ml,P＜0.01),但并未改善UVB照射對細(xì)胞增殖抑制的影響作用(P＞0.05),黃芪和雪茶提取液對UVA

5、l和UVB照射下細(xì)胞增殖的抑制作用均無顯著保護作用(P＞0.05)。杜仲提取液可以抑制MMP-1和MMP-3mRNA水平,其中1mg/ml作用最強(P＜0.01),同時還可以改善UV照射對Ⅰ型前膠原蛋白(P＜0.01)和Ⅲ型前膠原蛋白表達(dá)水平的抑制作用(P＜0.05)。
　　結(jié)論：UV照射可抑制成纖維細(xì)胞增殖;加速真皮細(xì)胞外基質(zhì)成分(ECM)的降解;抑制膠原纖維的合成代謝。在體外,UVA1要產(chǎn)生與UVB同等的抗細(xì)胞增殖作用,劑量約