肝組織工程中殼聚糖的改性應(yīng)用研究.pdf

1、目的：改性殼聚糖制備組織支架和膽紅素吸附劑,以研究其在肝組織工程中的應(yīng)用。
　　方法：1.采用高壓靜電成囊法制備微囊后針對外層囊壁繼續(xù)交聯(lián)殼聚糖,利用靜電引力自組裝使其體系化,形成微囊體系組織支架。2.搖床振蕩檢測組織支架的穩(wěn)定性,與IgG共培養(yǎng)后用熒光顯微鏡檢測支架的半通透性等理化性質(zhì)。3.膠原酶灌注法分離高活性小鼠原代肝細(xì)胞,分別使用微囊和組織支架包裹后培養(yǎng),檢測細(xì)胞活性和功能變化。4.殼聚糖單體與胺化劑乙二胺反應(yīng)并保護(hù)游離胺

2、基后加入交聯(lián)劑戊二醛,在高壓靜電環(huán)境下應(yīng)用低溫快速成型技術(shù)制備高胺化大孔徑膽紅素吸附劑。5.檢測高胺大孔徑膽紅素吸附劑的理化性質(zhì)。6.結(jié)扎大鼠膽管,制備高膽紅素血癥型大鼠模型。7.檢測高胺大孔徑膽紅素吸附劑的吸附效能。
　　結(jié)果：微囊ACA和ACAC的直徑約300微米,并均勻地分散在介質(zhì)中。ACAC的殼聚糖層與ACA的海藻酸鈉層通過靜電引力交聯(lián)形成大小可控、具有多個(gè)分割空間的組織支架,支架的大小依賴于兩種微囊的數(shù)目。搖床震蕩4小時(shí)

3、后微囊和微囊體系組織支架的完整率分別為87.5％和90％,10小時(shí)后分別下降到60％和73％,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01),表明組織支架有更好的機(jī)械強(qiáng)度。包裹肝細(xì)胞后,微囊與支架仍能保持同樣的結(jié)構(gòu)。通過熒光顯微鏡觀察AO/EB雙熒光染色后的肝細(xì)胞提示活躍細(xì)胞幾乎是100％。
　　微囊和組織支架中培養(yǎng)的肝細(xì)胞白蛋白水平在第2天分別為63.01ng/106細(xì)胞和62.32ng/106細(xì)胞,均是檢測到的最大的白蛋白分泌量。白蛋白的分泌

4、水平在2-4天后下降。第18天白蛋白水平分別下降到10.33和29ng/106細(xì)胞,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。兩組的LDH漏出率分別從24和27IU/L升高到41和50IU/L,它們之間沒有差異性(P＞0.05)。
　　高胺化殼聚糖低溫快速成型后體積大小均勻,激光粒度儀測試顯示D90為371.62μm,D95為418.465μm。掃描電鏡下可見表面以及內(nèi)部孔徑豐富,約為50μm。移植到大鼠腹腔后顯示生物相容性良好。采用高胺

5、基大孔徑殼聚糖顆粒吸附后的第1小時(shí)總膽紅素從117.4±12.2μmol/L降到67.8±21.5μmol/L,對照組的總膽紅素從115.8±11.7μmol/L,降到94.0±18.31μmol/L,3小時(shí)候兩組分別降到88.1±20.2μmol/L和56.5±13.4μmol/L。對照組已趨于平衡而實(shí)驗(yàn)組仍然具有良好的吸附效能,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01),說明大孔徑高胺基化殼聚糖顆粒采用低溫快速成型技術(shù)制備膽紅素吸附劑具有較大