高效液相熒光檢測法研究中藥五味子、香薷和茵陳中的活性成分.pdf

1、高效液相色譜分析法是在經(jīng)典柱色譜分析法的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種快速分離分析技術(shù)，因其具有適用范圍廣、選擇范圍寬、分離性能好、分析速度快、靈敏度高、結(jié)果精確、操作自動化程度高的特點被廣泛應(yīng)用于分離分析中藥中的活性成分。熒光分析法以其靈敏度高、選擇性好、檢出限低、用樣量少的優(yōu)勢而逐漸發(fā)展成為一種十分重要且有效的光譜化學(xué)分析手段。本文采用高效液相熒光檢測器對中藥五味子、香薷、茵陳中的有效成分進行了定性和定量分析。利用多發(fā)射色譜圖的保留時間和激發(fā)

2、、發(fā)射波長同時對色譜峰進行了歸屬，使定性更加真實、準確;利用多發(fā)射熒光色譜圖可明顯觀察出溶劑峰和散射峰的特點，在選擇流動相和檢測波長時有效規(guī)避了其對色譜峰疊加的干擾，使定量分析更加精確，可靠;同時將高效液相色譜法的低檢出限和熒光檢測法的高靈敏度有機地結(jié)合起來，使得該方法對熒光成分的檢測基本達到了ng·mL-1，甚至更低的水平。本文還通過傳統(tǒng)的高效液相紫外檢測法對中藥中相關(guān)成分的含量進行了驗證，充分揭示了高效液相熒光檢測法高度的選擇性、靈

3、敏性和準確性，從而開啟了對中藥有效成分進行含量測定的新篇章。
　　論文工作主要包括三部分:
　　1、首次建立了同時測定中藥五味子中原兒茶酸、五味子醇甲、安五脂素和五味子乙素的反相高效液相熒光檢測的定性定量分析方法。采用等度洗脫的方法，發(fā)現(xiàn)了甲醇-水或乙腈-水兩種流動相體系的不足，選擇了甲醇-乙腈-水(50∶25∶25)為流動相，λex/λem=244/356nm的條件下，克服了以往文獻中一次實驗只能測定一種成分的缺點，在20

4、min內(nèi)分離了這四種成分，并同時對其進行了分析測定，簡單快捷。該方法在其熒光最強且性質(zhì)穩(wěn)定的前提下確定了最佳的色譜條件，測得四種標(biāo)準品的日內(nèi)穩(wěn)定性和精密度的RSD在0.25％～0.81％之間，回收率在95.0％～105.0％之間，準確度高;所得的線性范圍更寬，靈敏度更高，其中五味子醇甲、安五脂素和五味子乙素的檢出限到了ng·mL-1的范圍。所建立的方法應(yīng)用于五味子市售藥材和對照藥材中四種標(biāo)準品含量的測定，結(jié)果準確、可靠。
　　2、

5、建立了同時測定中藥香薷中兩種揮發(fā)油（麝香草酚和香荊芥酚）含量的反相高效液相熒光檢測的定性定量分析方法。麝香草酚和香荊芥酚為同分異構(gòu)體，性質(zhì)相似，色譜保留屬性差異很小。本實驗采用等度洗脫的方法，選擇了乙腈-pH=2.97冰乙酸水溶
　　液(45∶55)為流動相，λex/λem=276/312nm，流速為0.5 mL·min-1的條件下，克服了大多數(shù)文獻中只能以二者總含量為指標(biāo)的缺點，在30min內(nèi)成功分離了兩種成分，并同時對其進行了

6、分析測定，簡單可靠。該方法測得兩種標(biāo)準品的日內(nèi)穩(wěn)定性和精密度的RSD在0.15％～0.35％之間，所得的線性范圍更寬，靈敏度高，檢出限均到了ng·mL-1的范圍，回收率均在95.0％～105.0％之間，準確度更高。所建立的方法應(yīng)用于香薷市售藥材和對照藥材中兩種成分含量的測定，結(jié)果準確、可靠。
　　3、首次建立了同時測定中藥茵陳中三種香豆素（東莨菪內(nèi)酯、濱蒿內(nèi)酯、7-甲氧基香豆素）含量的反相高效液相熒光檢測的定性定量分析方法。采用等

7、度洗脫的方法，選擇了甲醇-pH=2.20冰乙酸水溶液(55∶45)為流動相，λex/λem=356 nm/428 nm為檢測波長，流速為0.8 mL·min-1的條件下，克服了多數(shù)文獻中以總香豆素含量為指標(biāo)的缺點，在6min內(nèi)成功分離了三種成分，并同時對其含量進行了準確測定，解決了茵陳中東莨菪內(nèi)酯、濱蒿內(nèi)酯因含量極低而無法測定的難題。該方法測得三種標(biāo)準品的日內(nèi)穩(wěn)定性和精密度的RSD在0.5％～2.0％之間，準確度高，選擇性良好，靈敏度高